第十六章细胞的破碎详解.pptVIP

高压匀浆器破碎细胞 升高压力有利于破碎，它表明可以减少细胞的循环次数，在不明显增加通过量的情况下，甚至一次通过匀浆阀就可达到几乎完全的破碎，这样就可避免细胞碎片不至过小，从而给随后细胞碎片的分离工作带来好处。Brokman等人已研究了能适应于高压操作的匀浆阀，试验表明在约175 MPa的压力下，破碎率可达100％，但是也有试验表明当压力超过一定的值后，破碎率增长得很慢，在工业生产中，通常采用的压力为55~70Mpa。 目前三十一页\总数五十二页\编于八点 ③超声波破碎法 目前三十二页\总数五十二页\编于八点 超声波破碎 超声波破碎法（Ultrasonication)利用超声波振荡器发射的15-20kHz的超声波探头处理细胞悬浮液, 是一种液相剪切破碎法。 超声波振荡器有不同的类型，常用的为电声型，它是由发生器和换能器组成，发生器能产生高频电流，换能器的作用是把电磁振荡转换成机械振动。超声波振荡器以可分为槽式和探头直接插入介质两种型式，一般破碎效果后者比前者好。 目前三十三页\总数五十二页\编于八点 目前三十四页\总数五十二页\编于八点 超声波破碎的机理 在相当高的输入声能下，液体各个成核部位会形成许多小气泡。在声波膨胀相中，这些气泡会增大，而在压缩相中气泡会被压缩，直至不能再压缩时，气泡破裂，释放出猛烈的震波。震波通过介质传播。在气泡发生空穴现象的破碎期间，大量声能被转化成弹性波形式的机械能，引起局部的剪切梯度使细胞破碎。 在液流中当某点压力低于液体所在温度下的空气分离压时，原来溶于液体中的气体会分离出来产生气泡，这就叫空穴现象 。 目前三十五页\总数五十二页\编于八点 超声波破碎的适用范围 超声波破碎是很强烈的破碎方法，适用于多数微生物的破碎。 超声波破碎的有效能量利用率极低，操作过程产生大量的热，因此操作需在冰水或外部冷却的容器中进行。由于对冷却的要求相当苛刻，所以不易放大，主要用于实验室规模的细胞破碎。 目前三十六页\总数五十二页\编于八点 影响因素： 7）细胞悬浮液的流速：取决于停留时间影响总收率。 1）振幅：直接与声能有关系。 2）细胞悬浮液的黏度：影响能耗并会抑制空穴。 3）表面张力：影响细胞破碎效率。 4）被处理悬浮液的体积：体积大需要能量大。 5）珠粒的体积和直径：添加细小的珠粒（研磨） 。 6）探头的形状和材料：振幅与面积成反比。 目前三十七页\总数五十二页\编于八点 第十六章细胞的破碎详解演示文稿 目前一页\总数五十二页\编于八点 优选第十六章细胞的破碎 目前二页\总数五十二页\编于八点 3.1 概述 胞外型： 一些微生物在代谢过程中将产物分泌到细胞之外的液相中（称胞外酶），这些产品主要为医药、保健产品和工业用。这些蛋白质在细胞培养时被宿主细胞分泌到培养液中，提取过程只需直接采用过滤和离心进行固－液分离，然后将获得的澄清滤液再进一步纯化即可。其后续分离和纯化都相对简单。 目前三页\总数五十二页\编于八点 由于一些重组DNA（rDNA）产品结构复杂，必须在细胞内组装来获得生物活性，如果在培养时被宿主细胞分泌到培养液中，其生物活性往往有所改变，此类rDNA产品是细胞内产品（非分泌型），需要应用细胞破碎技术破碎细胞，使细胞内产物释放到液相中，然后再进行提纯，为后续的分离纯化做好准备工作。 概述 胞内型： 目前四页\总数五十二页\编于八点 几种由大肠杆菌表达的胞内重组药物 药物名称 宿主 用途 胰岛素 大肠杆菌 治疗糖尿病 人生长激素（HGH） 大肠杆菌 治疗侏儒病 α--干扰素 大肠杆菌 治疗毛状细胞白血病和 卡波济肉瘤 目前五页\总数五十二页\编于八点 细胞破碎（cell rupture）技术是指利用外力（物理、化学、酶或机械的方法）破坏细胞膜和细胞壁，使细胞内容物包括目的产物成分释放出来的技术。细胞破碎技术是分离纯化细胞内合成的非分泌型生化物质（产品）的基础。 概述 目前六页\总数五十二页\编于八点 微生物细胞和植物细胞外层均为细胞壁，细胞壁里面是细胞膜，细胞膜和它所包围的细胞浆合称原生质体。动物细胞没有细胞壁，仅有细胞膜。通常细胞壁较坚韧，细胞膜脆弱，易受渗透压冲击而破碎，因此细胞破碎的阻力主要来自于细胞壁。 基于遗传和环境等因素，不同类型生化物质其细胞壁的结构和组成不完全相同，故细胞壁的机械强度不同，细胞破碎的难易程度也就不同。此外，不同的生化物质其稳定性有较大差别，在破碎过程中应防止变性和被胞内的酶水解，因此，破碎方法的选择和操作条件的优化是十分必要的。 目前七页\总数五十二页\编于八点 革兰阳性细菌细胞壁结构模式图 革兰阴性细菌细胞壁结构