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色谱柱选择与维护第1页/共69页第2页/共69页广州菲罗门科学仪器有限公司 色谱柱的选择与维护 公司简介如何选择色谱柱A、固定相的选择B、PH的选择如何维护色谱柱第3页/共69页广州菲罗门科学仪器有限公司中国全权总代理第4页/共69页广州菲罗门科学仪器有限公司我们的宗旨: 以最真诚和迅速的态度替用户提供优质服务,解决分析的问题和需要第5页/共69页1982 成立于美国加州提供一系列非常完整的色谱柱极少数专门提供色谱耗材公司-液相和气相免费提供超过10000应用谱图免费提供技术支持免费提供技术资料第6页/共69页第7页/共69页2004 Labvision HPLC Column Report2004年一月到六月Labvision调查美国1200实验室结果使用柱子数量的比例Phenomenex 25%W 22.5%A 7.7%S 7.6%其他 5% 以下第8页/共69页如何选择适当的色谱柱第9页/共69页理想的柱子可以适用于分析所有的化合物永远不会坏理想分离度第10页/共69页决定峰分离度的三个要素 峰保留时间 选择性(出峰的顺序) 柱效第11页/共69页如何得到最理想的分析结果流动相,被分析物,和固定相三者之间的作用影响峰保留时间和峰分离性.峰保留时间短一般峰型较好,但分离可能不理想.所以为了调节最理想的分析结果,可以改变下列的一项或数项条件: 流动相 固定相 pH 温度 第12页/共69页固定相的选择 疏水性的选择 极性的选择 苯基的选择 第13页/共69页固定相疏水性考虑的要素 键合相的种类 (C18, C8, Phenyl, etc) 表面积 键合相的键合率第14页/共69页Luna? C18(2) – 月神品质可靠,世界畅销的 C18 柱重复性高 – 可以同时提供 3个不同的批次的柱子第15页/共69页Luna? C18(2)App ID 1125Ginseng RootColumn: Luna 5 μm C18 / ODS (2)Dimensions:150 x 4.6 mm IDElution Type:GradientEluent A: Acetonitrile/water (15:85)Eluent B: Acetonitrile/water (80:20)?Flow Rate:1.5 mL/minTemperature:25 °CDetection: UV-Vis Abs. – Variable Wave. @ 205 nm 第16页/共69页Luna? C8(2) C5 减少疏水性化合物的保留时间 减少分析的时间第17页/共69页Synergi? Max-RP 疏水性和 C18柱类似 – 但这是一支C12柱 提供比C18柱更尖的柱峰,尤其是分析碱性化合物第18页/共69页Synergi? Max-RPBasic Drugs at Neutral pH 第19页/共69页疏水性的比较C18 phasesC8 phase300? C18 phase第20页/共69页极性选择性的考虑首先考虑 固定相的极性封尾,封端基团 分析物的极性官能基 之间的作用第21页/共69页极性选择性如何增加极性的选择性 极性基团封端 极性基团镶嵌 苯基第22页/共69页极性选择性Columns: Luna? 5?m C18(2) YMC-Pack? 5?m Pro C18 Synergi? 4?m Polar-RP? (Ether-linked Phenyl) 150x4.6mmMobile phase: 75:25 Methanol:waterFlow rate: 1 mL/minComponents: 1. Estrone 2. Estradiol第23页/共69页Luna? C18(2)1+2YMC-Pack? Pro C181+21Synergi? Polar-RP?2极性选择性第24页/共69页Synergi?Synergi Max-RP - C12Synergi Hydro-RP - C18Synergi Fusion-RP – C18Synergi Polar-RP – Phenyl第25页/共69页Silica AdvantageBalancing Efficiency Backpressure5μ 4μ3μ higher efficiencieslower backpressuresPressure Drop (Bar)Plate Height (H)Flow Rate (mL/min)Linear Velocity (mm/sec)Synergi?第26页/共69页Synergi?第27页/共69页Synergi? Max-RP与C18柱性能类似的C12柱第28页/共69页Synergi