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抗体工程制药第1页/共66页第2页/共66页19.1 概 述19.1.1 抗体与抗原抗体（antibody，Ab）： 指能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）:具有抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白Ab生物学功能上的概念Ig化学结构上的概念第3页/共66页抗体的发现德国学者Behring和日本学者北里于1890年在Koch研究所应用白喉外毒素给动物免疫，发现在其血清中有一种能中和外毒素的物质，称为抗毒素。将这种免疫血清转移给正常动物也有中和外毒素的作用。这种被动免疫法很快应用于临床治疗。Behring于1891年应用来自动物的免疫血清成功地治疗了一个白喉患者，这是第一个被动免疫治疗的病例。第4页/共66页诺贝尔奖得主：德国科学家贝林 德国的细菌学家埃米尔·冯·贝林(Emil von Behring 1854-1917) 。1901年因其研究抗毒素血清，尤其在运用血清治疗防治白喉和破伤风等病症方面的贡献被授予诺贝尔医学奖。第5页/共66页抗原決定基● 一个抗原分子上可能有数个抗原決定基● 每個 抗原決定基 至少誘生一種專一性抗体● 蛋白质性 抗原決定基 含有六个以上氨基酸第6页/共66页19.1.2 抗体分子的结构与功能第7页/共66页免疫球蛋白的基本结构重链（heavy chain，H）由450～550个氨基酸残基组成，分子量50～75 kDa根据其重链稳定区的分子结构和抗原特异性的不同，分为五类：IgG、IgA、IgM、IgD、IgE，其重链分别为：γ、α、μ、δ、ε第8页/共66页免疫球蛋白的基本结构轻链（light chain，L）由214个氨基酸残基构成，分子量约25 kDa轻链有? 链和? 链两种，一个天然Ig分子上两条轻链的型别总是相同的，但同一个体内可存在分别带有? 链和? 链的抗体分子，其比例具有种属特异性第9页/共66页可变区（variable region，V区）轻链和重链中靠近N-端氨基酸序列变化较大的区域重链和轻链的V区分别称为VH和VL分别占重链和轻链的1/4和1/2VH和VL各有3个区域的氨基酸组成和排列顺序高度可变，称为高变区（HVR）或互补决定区（CDR），共同组成Ig的抗原结合部位在V区中CDR之外的区域氨基酸组成和序列相对不变，称为骨架区（FR）第10页/共66页恒定区（constant region，C区）靠近C-端氨基酸序列相对稳定的区域重链和轻链的C区分别称为CH和CL分别占重链和轻链的3/4和1/2不同型Ig的CL长度基本一致，但不同类Ig CH的长度不一第11页/共66页Ig的结构域两条重链和轻链均可折叠成数个球形结构域，每个结构域约由110个氨基酸残基构成二级结构由反向平行的两个?-片层（?-sheet）组成，两个?-片中心的两个Cys由一个链内二硫键垂直连接，形成“?-桶状（?-barrel）”结构，这种折叠方式称为“免疫球蛋白折叠（immuno- globulin folding）”第12页/共66页铰链区（hinge region）位于CH1与CH2之间含有丰富的Pro易伸展、弯曲，能改变两个结合抗原的Y形臂之间的距离，有利于两臂同时结合两个不同的抗原表位易被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶等水解，产生不同的水解片段第13页/共66页第14页/共66页第15页/共66页19.1.3抗体制备发展历程（1）多克隆抗体1890年，Behring和北里柴三郎发现白喉抗毒素1937年， Tiselius等人用电泳法将血清蛋白分为白蛋白、甲种（α）球蛋白、乙种（ β ）球蛋白、丙种（ γ ）球蛋白，并证明抗体活性主要存在于丙种球蛋白组分。获取多抗的主要途径是动物免疫血清、恢复期病人血清或免疫接种人群优点：作用全面，具有抗体的各种功能；来源广泛，制备容易缺点：特异性不高，易发生交叉反应，从而限制了其应用第16页/共66页第17页/共66页（2）单克隆抗体 McAb是将抗体产生细胞与具有无限增殖能力的骨髓瘤细胞融合，通过有限稀释法及克隆化使杂交瘤细胞成为纯一的单克隆细胞系而产生的。由于这种抗体是针对一个抗原决定族的抗体，又是单一的B淋巴细胞克隆产生的，故称为单克隆抗体。1975年，K?hler and Milstein等首次利用B淋巴细胞杂交瘤技术制备出 McAb. 在临床上主要用于诊断和治疗。第18页/共66页第19页/共66页木瓜蛋白酶水解片段水解部位是Ig铰链区二硫键连接的两条重链在近N-端，可将Ig裂解为两个完全相同的Fab片段和一个Fc片段Fab片段即抗原结合片段（fragment antigen binding），由一条完整的轻链和重链的VH和CH1结构域组成，为单价抗体片段，可与抗体结合，但不凝集Fc片段即可结晶片段（fr