生化实验血清醋酸纤维素膜电泳.pptxVIP

生化实验血清醋酸纤维素膜电泳;电 泳 技 术;Kaurin Tiselius (1902-1971)因研究电泳和吸附分析，特别是发现关于血清蛋白的复杂本质而获奖1948诺贝尔生理医学奖。 ; （－） （+） ----------------------------表面带负电荷 ++++++++++++++++ 带正电荷的水层 （－） （ + ） +++++++++++++++++ 表面带正电荷 --------------------------- 带负电荷的水层;电泳的影响因素： 1、影响电泳迁移率的外界因素： 电场强度 溶液的pH值 溶液的离子强度 电渗现象 2.影响电泳迁移率的内在因素： 质点所带净电荷的量 质点的大小和形状;电泳的分类;血清醋酸纤维素薄膜电泳;基 本 原 理;试剂 巴比妥缓冲液，染色液，漂洗液 材料 血清，醋酸纤维素薄膜 器材 电泳仪，培养皿，点样器，玻璃板 粗滤纸，铅笔，加样枪，镊子等。 ;操作步骤; 2. 点样（关键） 在薄膜的粗糙面点样。点样时，先用吸管将3微升血清均匀地涂在点样器表面，再用点样器“印”在薄膜的点样区内，样品呈线状，宽约1~2mm。;3. 电泳 将点样后的薄膜使粗糙面（点样面）向下，点样端置于负极，贴在电泳槽支架的“滤纸桥”上，平衡5min。 打开电源，调节电压和电流强度。调节电压至90-100V左右，电流强度为0.4～0.6mA/cm薄膜条宽，电泳时间40min-1h左右。;4. 染色 电泳完毕立即取出薄膜，直接浸入染色液中，染色5min。 5. 漂洗 用漂洗液漂洗，不停摆动薄膜条，每3-5min左右换一次液，连续更换三次，可使背景颜色脱去。将膜夹在干净滤纸中，吸去多余溶液。 操作中，注意控制染色和漂洗的时间，防止背景过深或某些区带太浅。;分清薄膜的点样面 注意点样样品的宽度和力度 注意薄膜放置的方向 控制染色及漂洗时间 保持良好的实验秩序;预期结果 一般的染色后的薄膜上可显现清楚的五条区带。从正极端起，依次为清蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ球蛋白。; 1、洗脱法：; 2、光密度计扫描法;血清中各蛋白组分的含量;临床意义;小 结;思考题;感谢观看！