遗传性疾病的分子诊断.pptxVIP

遗传性疾病的分子诊断; 1. 点突变的诊断 ; 2.片段性突变的检测;杜氏和贝氏肌营养不良症的基因诊断;DNA;一、限制性酶切图谱直接分析法 ;;;;第10页/共54页; 将与致病基因连锁的某种多态性标志作为遗传标志，在同一个家系成员中探查是否存在致病基因的方法即为基因连锁分析法。 ;第12页/共54页;第13页/共54页;第14页/共54页;第15页/共54页;第16页/共54页; 遗传性疾病的主要分子机理是基因突变，因而是基因诊断的最佳适应症。用分子生物学技术直接检测病原体，可对感染性疾病特异、快速地作出早期诊断。;血红蛋白病 最早成功进行产前基因诊断;;; a-地中海贫血： 不同数量(1-4个)a-珠蛋白基因缺失 a a ? 14kb BamHI BamHI aa/aa aa/-- aa/a- a-/-- --/-- 10kb 14kb 10kb a;b-地中海贫血 主要是b-珠蛋白基因点突变。 突变常不涉及限制酶识别位点 不能用限制性酶切图谱进行直接分析。 诊断方法： RFLP连锁分析 间接检测病变基因 ASO 斑点印迹杂交分析 直接检测病变基因点突变 DNA芯片（包括各种基因突变位点的所有探针） 可快速、简便地检出所有已知突变 ; 甲型血友病（血友病A） 凝血因子IIIV（F IIIV）缺乏所致， 发病的分子机制是F IIIV基因突变，主要为点突变或少数硷基 的缺失和插入以及第22内含子的大片段倒位。 乙型血友病（血友病B） 起因于凝血因子IX的缺乏 其分子机制是分布于整个基因各处的多种形式的突变。 诊断方法：PCR/ASO直接检测法（点突变） PCR/RFLP连锁分析法（多种不定突变） ;人类基因组上的DNA遗传标记;短串联重复序列 STRs (short tendem repeats, Microsatellites ); 定义:主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA序列多态性。与RFLP与STR不同,它是直接以序列的变异作为标记,而不是以片段的长度差异作为标记. 人类基因组图谱的初步分析表明，共有3万至3.5万个基因。有300多万个单核苷酸多态性,SNP在人类基因组中广泛存在，平均每500～1000个碱基对中就有1个，3-4个相邻的标记构成的单倍型（haplotype）就可有8-16种。 1996年，Lander报道了用单核苷酸多态性 标记制备第三代遗传连锁图的遗传标记。;　SNP用作遗传标记具有以下优点：;点突变 (point mutation);片段性突变(fragememtal mutation);DMD的基因检测;;;;;多等位基因多态性(multi-allele);;单核苷酸多态性(single nucleotide poly- morphism，SNP);凝血因子Ⅷ(F8)基因的主要遗传缺陷;一 DNA多态;DNA分析中常用的遗传性多态性标记有3类：;二)数目变异串联重复，variable number tandem repeats, VNTR）;VNTR两侧酶切位点固定，但两酶切点之间的串联重复拷贝数不同，酶切后产生不同长度的片段。 DNA多态可以通过PCR扩增后电泳来检出，称扩增片段长度多态（amplified fragment length polymorphism, Amp-FLP）;VNTR 酶切，电泳后的检测结果;PCR-VNTR检测;PCR-VN