基因工程全英.pptxVIP

第1页/共125页基因工程全英第2页/共125页第十三章基因工程与基因体外表达Gene Engineering and Gene Expression第3页/共125页目的与意义1.获得感兴趣的目的基因2.研究基因结构特征3.表达基因产物4.研究基因功能第4页/共125页基本要素1. 目的基因 (target genes)2. 工具酶 (tool enzymes)3. 载体 (vectors)4. 宿主细胞 (host cells)第5页/共125页Main contents 基本概念及背景工具酶DNA载体基因克隆过程真核细胞基因转染基因改造克隆基因表达电子克隆第6页/共125页For Example 如何从植物中克隆法呢基焦磷酸合酶(FPS)?1. 查资料认识FPS2. 设计实验方案3. 可行性分析第7页/共125页For Example 第8页/共125页FPS 克隆： RT-PCR， 3-RACE， 5-RACE改进的异硫氰酸胍一步法提取三七根部总RNART-PCR扩增fps部分保守序列3’-RACE 及克隆测序5’-RACE 及克隆测序序列拼接第9页/共125页mRNA: 5’ AAAAAA3’TTTTTTT-接头cDNA:Oligo dT接头基因特异性引物3’ Full RACE原理图第10页/共125页未知区域未知区域未知区域Target mRNAAAAAAAAA-----AAAAAAAA-----已知序列5’ 5’ PPP未知区域未知区域S2A2S1A12nd PCR primers1st PCR primers5’ Full RACE原理图(1) 5’-端磷酸化RT-Primer逆转录(2) RNA分解(3) 用RNA ligase进行环化或形成首尾连接物5’-端磷酸化RT primer部位(4) 1stand 2nd PCR包含未知的5‘上游区域的扩增产物第11页/共125页Thank You第12页/共125页Some concerned concepts:克隆Cloning DNA重组DNA recombinationDNA重组技术DNA recombination technique分子克隆Molecular cloning基因工程Genetic engineering第13页/共125页第14页/共125页三大理论基础40年代，O.T. Avery等通过肺炎链球菌转化实验发现遗传物质的携带者是DNA而不是蛋白质1953年，Watson 和Crick揭示了DNA分子的双螺旋结构模型和半保留复制原理，解决了基因的自我复制和传递的过程。50年代末到60年代初，相继提出了“中心法则”和操纵子学说，成功破译了遗传密码，阐明了遗传信息的流向和表达问题。第15页/共125页三大技术发明 DNA分子的体外切割与连接技术 1970年Smith, Wilcox 流感嗜血杆菌(Haemopbilus influenzae) Hind II 1972年Boyer EcoR I “GAATTC” 1967年 世界上5个实验室几乎同时发现了DNA ligase 1970年T4 DNA ligase基因工程载体的使用：plasmid, phage, viruses大肠杆菌转化体系的建立----复制工厂第16页/共125页1978年Nobel 医学与生理学奖The /wiki/Nobel_PrizeNobel Prize in Medicine was awarded, in 1978, to /wiki/Daniel_NathansDaniel Nathans, /wiki/Werner_ArberWerner Arber, and /wiki/Hamilton_SmithHamilton Smith for the discovery of restriction endonucleases. Their discovery lead to the development of /wiki/Recombinant_DNArecombinant DNA technology that allowed, for example, the large scale production of human /wiki/Insulininsulin for /wiki/Diabetesdiabetics using /wiki/E._coliE. coli bacteria. Over 3000 restriction enzymes have been studied in detail, and more than 600