微生物与免疫学试验（六）肥达肠道厌氧.pptVIP

微生物与免疫学试验（六） * 要求 讲解：肠道杆菌、霍乱弧菌、3种厌氧菌 示教片：肠道杆菌、霍乱弧菌、3种厌氧菌 示教平板：SS平板（肠道致病均和非致病均各一个）、双糖铁培养基（大肠、痢疾、伤寒、变形）、炭疽卷发样菌落； 其它示教：小生化反应（大肠、痢疾、伤寒、变形） 操作：肥达反应（注意标签贴试管上，不要贴到架子上） 录像：肠道杆菌 * 操作：肥达反应（试管凝集反应） 器材：试管6支/人，试管架1个/2人， 吸管1支/人，标签1个/人 已知： 伤寒H抗原、O抗原 （4人/组） 甲型副伤寒H抗原 乙型副伤寒H抗原 待检：病人血清（1：10稀释） * 倍比稀释法 1 2 3 4 5 6 生理盐水 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5 血清 0.5（吹打） 0.5 0.5 0.5 0.5 0.5（弃） 菌液 0.5ml/管 ，从第6 1管加，振匀 水浴43度，2h 最终血清 1：40 1：80 1：160 1：320 1：640 对照 稀释度 凝集强弱 效价 *吸管 桶，试管 锅, 标签贴在试管上。 * 结果判断 以出现 凝集的血清最高稀释倍数为该血清抗体效价 O 达到1：80，H达到1：160 H甲（PA）或H乙（PB）达到1：80或以上有诊断意义 结合当地流行病学史、病程和抗体消长的意义进行判断。 * 肠道杆菌的鉴定 * 大肠杆菌 伤寒杆菌 变形杆菌 痢疾杆菌 * SS培养基 胆盐 枸橼酸盐 煌绿 乳糖 蛋白胨 中性红 抑制杂菌生长 被非致病菌分解产酸 被致病菌分解产碱 酸：红 碱：黄 * Shigella-Salmonella medium 菌落红色——乳糖发酵阳性，非致病菌 菌落无色——乳糖发酵阴性， 致病菌 * 双糖铁培养基 下层 上层 葡萄糖 半固体 酚红 乳糖 硫酸亚铁 * 生化反应表 葡 乳 麦 甘 蔗 H2S 尿素 靛 大肠 - - - 痢疾 - - - - - - 伤寒 - -/+ - - 变形 - - - - - * 霍乱弧菌 * 炭疽杆菌 致病菌中最大的G＋粗大杆菌 ,两端平切、排列呈竹节状；有荚膜，芽胞在有氧条件下形成，呈椭圆形，位于菌体中央 * ●培养: 30~35℃，在普通琼脂培养基上形成灰白色粗糙型 菌落，边缘不整齐，在低倍镜下观察边缘呈卷发状 炭疽杆菌培养基 * 厌氧菌 * 1、破伤风：G＋；芽胞位于菌体顶端，大于菌体， 使细菌呈鼓槌状；菌体细长，有周身鞭毛 * 厌氧血平板上的羽毛状菌落 * 庖肉培养基 成分　　牛肉浸液　　　　　　　1000mL　　蛋白胨　　　　　　　　30g　　酵母膏　　　　　　　　5g　　磷酸二氢钠　　　　　　5g　　葡萄糖　　　　　　　　3g　　可溶性淀粉　　　　　　2g　　碎肉渣适量　　pH7.8制法　　1　称取新鲜除脂肪和筋膜的碎牛肉500g，加蒸馏水1000mL和1mol/L氢氧化钠溶液25mL，搅拌煮沸15min，充分冷却，除去表层脂肪，澄清，过滤，加水补足至1000mL。加入除碎肉渣外的各种成分，校正pH。　　2　碎肉渣经水洗后晾至半干，分装15mm×150mm试管约2～3cm高，每管加入还原铁粉0.1～0.2g或铁屑少许。将上述液体培养基分装至每管内超过肉渣表面约1cm。上面覆盖溶化的凡士林或液体石蜡0.3～0.4cm。121℃高压灭菌15min。 * 庖肉培养基 破伤风梭菌培养基 破伤风痉挛 * 2、产气荚膜梭菌：两端几乎平切的G＋粗大杆菌；芽胞位于 次极端，呈椭圆形，不大于菌体；在体内有明 显的荚膜；无鞭毛 * 生化反应： 血琼脂平板上，双层溶血环（θ、α毒素），“靶样溶血” 血平板（双层溶血环） * 代谢活跃 高层琼脂断裂试验 庖肉培养基：分解肉渣中的糖类，产酸产气，肉渣淡红色 牛乳培养基：可出现“汹涌发酵”（stormy fermentation） * Nagler反应（＋） 卵黄琼脂平板 * 庖肉培养基 牛乳培养基－汹涌发酵 * 3、肉毒梭菌