基因功能的验证.pptxVIP

基因功能的验证; 一是通过增强其表达，取得表达产物进行研究， 增强其表达因为不能反映基因产物的真实表达情况，而逐渐被抛弃 二是减弱或者终止其表达，观察整体功能的变化，进而推测相应的基因功能;1 RNA干扰技术;第4页/共25页;当dsRNA导入细胞后，被一种dsRNA特异的核酸内切酶识别，切割成21-23核苷酸长的小片段，这些片段可与该核酸酶的dsRNA结合结构域结合，并且作为模板识别目的mRNA。; RNAi 技术的应用 ;在功能基因组研究中，需要对特定基因进行功能丧失或降低突变，以确定其功能。 由于RNAi具有高度的序列专一性，可以特异地使特定基因沉默，获得功能丧失或降低突变，因此RNAi可以作为一种强有力的研究工具，用于功能基因组的研究。 ; 基因敲除（knock out of gene）：利用基因打靶技术，用无功能的外源基因转入细胞与基因组中同源序列进行同源重组，把具有功能的同源序列置换出来，造成功能基因的缺失或失活，这一技术叫基因敲除。 ;构建重组载体 重组DNA转入受体 细胞核内 筛选目的细胞 转基因动物模型的建立 ;;鉴定新的蛋白与蛋白相互作用 鉴定蛋白级联底物 鉴定突变对蛋白与蛋白结合的影响 在已知的相互作用中鉴定干扰蛋白质 (反向双杂交系统);利用酵母作为真核蛋白相互作用的模型;是一种在体外研究两种或多种蛋白质之间物