TCASME熟肉制品中单核细胞增生李斯特氏菌 快速检测技术规范.pdfVIP

ICS 67.050 CCS C 53 T/CASME 中国中小商业企业协会 团体 标准 T/CASME XXX—2023 熟肉制品中单核细胞增生李斯特氏菌 快速检测技术规范 Technical specification for rapid detection of Listeria monocytogenes in cooked meat products （征求意见稿） 2023 - XX - XX 发布 2023 - XX - XX 实施 中国中小商业企业协会 发 布 T/CASME XXX—2023 熟肉制品中单核细胞增生李斯特氏菌快速检测技术规范 1 范围 本文件规定了熟肉制品中单核细胞增生李斯特氏菌快速检测的环介导恒温核酸扩增法及PCR-试纸 条法。 本文件适用于熟肉制品中单核细胞增生李斯特氏菌的定性检测。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB 4789.30—2016 食品安全国家标准 食品微生物学检验 单核细胞增生李斯特氏菌检验 GB/T 6682—2008 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 27403—2008 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测 GB/T 42233 快速检测 术语与定义 3 术语和定义 GB/T 42233界定的术语和定义适用于本文件。 4 第一法 环介导恒温核酸扩增法 原理 利用环介导恒温扩增 （LAMP）技术进行单核细胞增生李斯特氏菌的筛选检测。根据单核细胞增生李 斯特氏菌特有的virR基因序列 （参见附录A）设计一套特异性引物，特异性识别靶序列上的六个独立区 域。利用Bst DNA聚合酶启动循环链置换反应，在单核细胞增生李斯特氏菌virR特异基因序列启动互补 链合成，在同一链上互补序列周而复始形成很多类似花椰菜结构的茎环DNA混合物。当发生扩增反应时， 反应体系中添加的染色剂 （SYBR Green I）能以嵌入方式结合到扩增出来的DNA混合物小沟处，随着双 链DNA的增加，SYBR Green I染料荧光信号随之增强，通过荧光定量聚合酶链式反应仪 （荧光定量PCR 仪）实时监测产物扩增情况，从而达到检测目的基因是否得到扩增。根据Ct值以及是否有“S”型扩增 曲线判定结果。 试剂与材料 4.2.1 引物 PCR反应使用的引物应符合表1的规定。 1 T/CASME XXX—2023 表1 PCR 反应使用的引物 引物名称 引物序列（5’→3’） 片段长度 F3 GTCTTTTAAGTGGAGTAAACCTT B3 ACAAGACTTCACCAATCCA 216 bp FIP CCTGTGCCAAAGCATTTTTACATTTTTTAGGCAAGTCATCTTCTTC