生物固氮的N同位素示踪直接测定方法.pptxVIP

生物固氮的N同位素示踪直接测定方法; 1.15N2的制备、纯化和存储 15N2可由15N标记铵盐在碱性条件下和次溴酸盐反应制得，即 试剂 用Bremner法制备次溴酸盐一碘溶液。将400克NaOH溶解到60毫升水中，将此NaOH溶液的一半加入带有温度计并以碎冰冷却的一公升Ernlemeyer烧瓶中，将120毫升Br2缓慢地、逐滴地加入, 猛烈搅拌, 使温度保持在5 ℃ 以下，再加入另一半NaOH溶液，将此混合液搅拌几分钟，在冰箱中贮存一个星期之后, 将沉淀的NaBr结晶与上清液分开，用等体积的KI溶液（0.2%，w/v）稀释上清液。1 毫升这种溶液可以使5-6毫克NH3+氧化成N2。 100毫升水中依次溶解5克KMn4和2.5克KOH, 制成KMNO4-KOH溶液，100毫升硫酸溶液（ 5%，v/v） 中溶解20克NaSO4, 得到NaSO4–H2SO4溶液。 ; 装置 制备装置如图所示。各玻璃部分间是通过涂抹硅油的磨口接合并用耐压管道连结。图中Y和Z分别为KMnO4-KOH和Na2SO4-H2SO4吸存器，15N2气贮存瓶（V）与另一只瓶子（W）连结, 可以防止空气回流到V。选用大小不同的圆底烧瓶, 可以使X、Y 和Z部分的容积, 比试剂在一个大气压下产生的15N2 的总体积稍微大一些，这时装置内部的气压应该小于大气压。 ; 步骤 在烧瓶X中放入(15NH4)2SO4，分液漏斗中加入相应数量的次嗅酸盐一碘溶液。在Y和Z中分别加入KMnO4-KOH溶液和Na2SO4-H2SO4溶液, 约到其容积的1/10即可。用真空泵从?处抽气, 使X的真空度达到大约10-2-10-3托，关闭活栓a ，然后打开分液漏斗的活栓, 将次嗅酸盐一碘溶液滴入X中, 产生15N2气，在产气过程结束后， 将蒸馏水加入分液漏斗, 并使蒸馏水滴入烧瓶X中，当瓶中 15N2的压力稍大于大气压力时, 滴漏过程便自动停止。; 打开活塞b、c 、d、e 和f, 关闭活塞g, 从活塞f处对Y和Z抽真空, 关闭活塞c , 打开活塞a , 小心地打开活塞b 使X瓶中15N2的进入Y,待分液漏斗中的水完全置换出X瓶中的15N2 气体后, 关闭活塞b。关闭活塞e并打开活塞c, 从?处放水进入Y中， 置换15N2气体使其转至烧瓶Z , 关紧活塞d, 由活栓f连通Z和V, 并打开活塞c和g，从?处加水至Z中。这样纯化后的15N2气体就被转移至事先装满水的贮存瓶V中, 从V 排水至W瓶, 这种布置可阻止空气从活栓h 处回流 15N2气完全转移到瓶V中之后, 将它和瓶W一起, 从活栓f和g之间, 与整个装置系统开。;图.制备15N2的装置。X， 15N2发生器；Y，KMnO4（5%，w/v）-KOH（2.5%）吸存器；Z，Na2SO4（20%）-H2SO4（5%,v/v）吸存器；V， 15N2 存储瓶；W，排水存储瓶。1.蒸馏水，2.次溴酸盐-碘溶液；3（15NH4）2SO4；4. KMnO4 - KOH溶液;5. Na2SO4-H2SO4 。; 2.固氮测定装置和流程 固氮生长箱的室C与A和B通过涂抹硅油的磨砂平边接合在一起，在D、E、F、G和H管口有聚四氟乙烯栓塞阀，整个容器保持气密状态。15N2依次通过碱性高锰酸钾溶液和酸性硫酸钠溶液并F口引入玻璃容器。在15N2 引入前，气密容器先用真空泵抽真空，当水下的泥土中由于负压冒出气泡时，继续且保持几分钟后，然后引入15N2 使容器中的压力达到大气压。为了保持作物的生理条件，使用空气泵通过二氧化碳缓冲溶液循环密封室上端的（进口D和出口E）的大气相。缓冲溶液由混合物组成K2CO3（1/20M）-KHCO3（1/10M），缓冲液的构成比例可以调节，以便顶部的CO2浓度维持在800ppm。;图.15N2暴露气密性生长室。A茎室；B，中间室；C，根室；D大气循环进口；E，大气循环出口；F， 15N2 气体入口；G，气体采样器附件；H，排水孔。; 3.同位素化学计量关系 设样品中N来自大气标记Natm和非大气非标记Nnon两部分组成，其15N原子百分超为Esample，且大气标记15N的原子百分超为Eatomsphere，则由同位素质量平衡，有 则，样品中的N来自大气标记N的比例为 ; 固氮的N量为 在整个固氮暴露过程中，也许由于系统外大气的泄入或土壤N2的发射对气相标记15N2的稀释作用，使得Eatomshere并不恒定，而是随时间减少的，因此计算时应取算术或积分平均值。; 4.举例 参见：Atm