酶制剂生理活性评价技术规范征求意见稿.docxVIP

GB/T XXXXX – 2012 GB/T XXXXX – 2012 PAGE PAGE 3 PAGE 1 GB/T XXXXX—2012 GB/T XXXXX—2012 PAGE PAGE II GB/T XXXXX—201X 中华人民共和国国家标准 GB/T XXXXX—201X 中华人民共和国国家标准 ICS 07 ICS 07.080 A 21 酶制剂生理活性评价技术规范 酶制剂生理活性评价技术规范 Technical specifications of physiological activity measure for Enzyme （征求意见稿） 发布中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局中国国家标准化管理委员会201X-XX-XX 发布 发布 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局 中国国家标准化管理委员会 201X-XX-XX 发布 201X-XX-XX实施 GB/T ××××—201× 酶制剂生理活性评价技术规范 1 范围 本标准规定了酶制剂生理活性评价原理、仪器和设备、试剂和材料、析步骤及结果计算。 本标准适用于饲料、食品等酶制剂的生理活性评价。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 5009.124 食品安全国家标准 食品中氨基酸的测定 GB/T 5009.7 食品安全国家标准 食中还原糖的测定； GB 5009.168 食品安全国家标准 食品中脂肪酸的测定； 中华人民共和国兽药典（2015年版） 3 术语与定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 酶制剂 Enzyme 由动物或植物的可食或非可食部分直接提取，或由传统或通过基因修饰的微生物（包括但不限于细菌、放线菌、真菌菌种）发酵、提取制得，用于食品加工或提高饲料转化率等，具有特殊催化功能的生物制品。 3.2 体外消化模型 In vitro digestion model 通过模拟人或者动物消化生理特点，采用与人或动物体内相近的消化环境和消化酶系，在体外评定外加酶作用或饲料消化吸收的一种方法。 3.3 生理活性 physiological activity 酶制剂在人或动物体内消化环境中，受温度，pH等因素影响所表现出的对底物的消化能力。 3.4 模拟胃消化液 stimulated gastric fluid 模拟人或动物体胃液中的pH、盐离子浓度及蛋白酶浓度设置的消化液。 3.5 模拟肠消化液 stimulated intestinal fluid 模拟人或动物体肠液中的pH、盐离子浓度及胰酶浓度设置的消化液。 4 原理 首先用胃蛋白酶在酸性条件下处理含有酶制剂样品的底物，完成在模拟胃内的消化过程，然后再用含有蛋白酶和脂肪酶的胰酶在中性条件下继续消化，完成养分在小肠内的消化过程，最后分离已消化与未消化养分，通过分析酶制剂对主要底物的转化效率，以达到预测食品或饲料中的酶制剂在体内的生理活性的目的。 5 试剂和材料 5.1 胃蛋白酶 活性大于1:3800 生化级胃蛋白酶（临用前可按《中华人民共和国兽药典》中规定的方法测定胃蛋白酶活性）。 5.2 胰酶 为胰蛋白酶与胰脂肪酶的复合制品，每种酶的酶活性应大于1:3800。 5.3 1M 盐酸溶液 用量筒准确量取 8.18 mL浓盐酸，倒入已经装有60mL蒸馏水的烧杯中，不断搅拌，待冷却后转移到容量瓶中并定容至100 mL。 5.4 1M 氢氧化钠溶液 准确称取4g氢氧化钠试剂溶解于装有60 mL蒸馏水的烧杯中，冷却后，再转移到100 mL的容量瓶中并定容至100 mL。 5.5 胃电解质溶液 3.1 g氯化钠、1.1 g氯化钾、0.15 g氯化钙，0.6 g碳酸氢钠溶解于1 L的去离子水中。 5.6 体外模拟胃液 800 mg 胃蛋白酶加入到 10 mL胃电解质溶液中，混合均匀，用 1 mol/L盐酸溶液调pH值至2.8。 5.7 肠电解质溶液 5.4 g氯化钠，0.65 g氯化钾，0.33 g氯化钙溶解于1 L去离子水中。 5.8 体外模拟肠液 2.0 g 胰酶加入到 10 mL 肠电解质溶液中，混合均匀，用1 mol/L氢氧化钠溶液调pH值至6.5。 6.仪器和设备 6.1 电子分析天平：精度0.001g。 6.2 pH计：精确至0.01。 6.3 恒温生化培养箱：震荡120次/min，温度精度0.1℃。 6.4 秒表。 6.5 移液枪：精度为0.1μL。 7 分析步骤 7.1 称样 固体酶制剂：称取0.05 g，精确到0.0001 g，溶于1 mL模拟胃液中备用； 液体酶制剂：准确量取