理学核酸代谢.pptxVIP

理学核酸代谢;限制性内切酶：能够识别双链DNA上特定核苷酸序列并进行切割的核酸内切酶。P285;1.核苷酸的生物合成P289 动植物、微生物可合成嘌呤或嘧啶的核苷酸，基本途径有： ①利用核糖、磷酸、Aa、CO2、NH3合成 核苷酸，不经过碱基、核苷的中间阶段，称为“从头合成”途径或“从无到有”途径； ②利用体内游离的碱基或核苷合成核苷酸 ，称为补救途径。;2.基本概念P300;中心法则(The Central Dogma)：由DNA决定 RNA的碱基顺序，又由RNA决定蛋白质中的Aa顺序，这叫中心法则，也叫信息流。P301;(一) DNA的复制;全保留复制;第1页/共69页;2.DNA的半不连续复制P318;要点：;②另外一条链(随后链,lagging strand)的合成是不连续的，复制叉打开后，也是;冈崎片段P308;(2)条件P303-306;(1)引物酶;(2) DNA聚合酶;DNA聚合酶Ⅱ：多亚基酶，聚合作用，但 聚合活力很低；具有3’→5’外切酶活性。;(3)连接酶;(4)解螺旋酶（解链酶）;(5)单链结合蛋白（SSB ）;(6)拓扑异构酶（旋转酶 ）;←旋转酶;(3)规律;;③DNA复制可以是单向的，也可以是双向的,后者更常见；;⑥复制是半不连续的 ，前导链是连续合成的，随后链是不连续合成的，通过连接酶把若干片段连接起来； ⑦各个短片段开始复制时，都需要RNA引物； ⑧复制有多种机制，会因环境的不同(酶的丰度、温度、营养条件等)而有不同的起始机制及链的延长方式。;5.复制过程(大肠杆菌 )P307;(1)起始;引物合成：引发体引导引物酶到达适当的位置合成引物。;(2)延长;√ 随后链的模板绕DNA聚合酶向后回折成环，复制叉上的DNA聚合酶III全酶同时合成前导链和随后链。;(3)终止;（4）真核生物的DNA复制P310;真核生物复制的终止:染色体DNA呈线性 ，复制在末端停止。;第34页/共69页;(二)逆转录作用P312;前病毒学说（Temin）——逆转录过程;依赖RNA的DNA聚合酶;7.DNA的损伤与修复P312;紫外光;（2）DNA 的切除修复;（3）DNA的重组修复;8.突变(Mutation)P315;二、RNA的生物合成;转录与复制的区别主要有：;2.RNA聚合酶(转录酶);大肠杆菌RNA聚合酶组成与功能P327;3.RNA的转录过程(大肠杆菌)P317-319;启动子：指RNA聚合酶识别，结合和开始转录的一段DNA序列。P317 转录因子：RNA聚合酶在进行转录时常需一些辅助???子(蛋白质)参与作用，称之为转录因子。终止子(terminator)：提供转录停止信号的DNA;(1)起始阶段;(2)延长阶段;(3)终止阶段;第52页/共69页;依赖于 因子的终止;真核生物的RNA合成比原核生物复杂得多 ，RNA聚合酶有三种： Ⅰ（A）核仁——rRNA前体 Ⅱ（B）核质——mRNA前体 Ⅲ（C）核质——tRNA和5sRNA前体;DNA模板功能抑制剂：放线菌素D、烷化剂、嵌入染料。P325 RNA聚合酶的抑制剂： 利福平——与原核生物RNA聚合酶的β亚基结合，阻止RNA合成；P325 α-鹅膏覃碱——抑制真核生物RNA聚合酶Ⅱ和Ⅲ的活性，阻断mRNA的合成。P321;5.转录后的加工;真核：100多个核苷酸残基被甲基化修饰，多数在核糖2’-OH上；RNaseⅢ及其它核酸内切酶裁切。;(2) tRNA前体的加工P320;(3) mRNA前体的加工;磷酸酶;第61页/共69页;DNA;6.RNA指导下的RNA的合成(RNA复制 )P324;四、基因工程简介P325;2.基因工程的操作技术;聚合酶链式反应(Polymerase chain reaction, PCR);PCR技术每轮循环包括：;PCR技术的发明 √ PCR的发明是DNA操作技术的革命 √ 美国Mullis教授 开汽车时的联想逶迤崎岖的山路——DNA双螺旋 行驶的汽车——一小段DNA引物 …… 1988年发明了PCR技术 1993年获得诺贝尔奖;感谢观看!