代谢工程改造大肠杆菌合成己二酸.docxVIP

生 物 工 程 学 报 Chinese Journal of Biotechnology /cjbcn DOI: 10.13345/j.cjb.220992 刘洁 等/代谢工程改造大肠杆菌合成己二酸 Jun. 25, 2023, 39(6): 2375-2389 ?2023 Chin J Biotech, All rights reserved 2375 2375 ·微生物细胞合成 · 刘立明 江南大学教授，博士生导师，教育部高层次人才，中组部首批青年 拔尖人才人选， 科技部中青年科技创新领军人才人选， 江苏省 333 工程第二层 次人选，第 15 届江苏省青年科技奖获得者，江苏省杰出青年基金获得者，教 育部新世纪优秀人才支持计划人选。主要从事微生物制造工程的研究工作。先 后负责国家重点研发计划等国家或省部级科研项目 20 余项；发表 SCI 论文 160 余篇； 授权中国发明专利 130 余项；近 10 项产品应用于工业化生产，获 国家技术发明二等奖、国家科技进步二等奖、教育部科技进步一等奖等国家级 或省部级奖励 8 项。 代谢工程改造大肠杆菌合成己二酸 刘洁 1,2 ，高聪 1,2 ，陈修来 1,2 ，郭亮 1,2 ，宋伟 3 ，吴静 3 ，魏婉清 1,2 ，刘佳 1,2， 刘立明 1,2* 1 江南大学 食品科学与技术国家重点实验室，江苏 无锡 214122 2 江南大学 食品安全国际合作联合实验室， 江苏 无锡 214122 3 江南大学生命科学与健康工程学院，江苏 无锡 214122 刘洁 刘洁, 高聪, 陈修来, 郭亮, 宋伟, 吴静, 魏婉清, 刘佳, 刘立明 . 代谢工程改造大肠杆菌合成己二酸[J]. 生物工程学报, 2023, 39(6): 2375-2389. LIU Jie, GAO Cong, CHEN Xiulai, GUO Liang, SONG Wei, WU Jing, WEI Wanqing, LIU Jia, LIU Liming. Metabolic engineering of Escherichia coli for adipic acid production[J]. Chinese Journal of Biotechnology, 2023, 39(6): 2375-2389. 摘 要： 己二酸是一种具有重要应用价值的二元羧酸， 是合成尼龙-66 的关键前体。目前， 生物 法生产己二酸存在生产周期长、生产效率低的问题。本研究选择一株野生型高产琥珀酸菌株大肠 杆菌(Escherichia coli) FMME N-2 为底盘细胞， 首先通过引入逆己二酸降解途径的关键酶， 成功构 建了可合成 0.34 g/L 己二酸的 E. coli JL00 菌株； 接着， 对合成路径限速酶进行表达优化， 使 E. coli JL01 菌株在摇瓶发酵条件下产量达到 0.87 g/L； 随后， 通过敲除 sucD 基因、过表达 acs 基因和突 变 lpd 基因的组合策略平衡己二酸合成前体的供应，优化菌株 E. coli JL12 己二酸产量进一步提升 至 1.51 g/L；最后，在 5 L 发酵罐上对己二酸发酵工艺进行优化。工程菌株经 72 h 分批补料发酵， 己二酸的产量达到 22.3 g/L，转化率为 0.25 g/g，生产强度为 0.31 g/(L·h)，具备了一定的应用潜力。 本研究可为包括己二酸在内的多种二元羧酸细胞工厂的构建提供理论依据和技术基础。 关键词： 大肠杆菌；代谢工程；己二酸；发酵优化 资助项目：国家重点研发计划(2021YFC2100700)；江苏省杰出青年基金(B This work was supported by the National Key Research and Development Program of China (2021YFC2100700) and the Outstanding Youth Foundation of Jiangsu Province (B. *Corresponding author. E-mail: mingll@ Received: 2022-12-12; Accepted: 2023-02-20 2376 2376 ISSN 1000-3061 CN 11-1998/Q 生物工程学报 Chin J Biotech Metabolic engineering of Escherichia coli for adipi