D_L-肽链内切酶基因cwlO_缺失促进地衣芽孢杆菌利用L-谷氨酰胺合成聚γ-谷氨酸.docxVIP

微生物学通报 Microbiology China /wswxtbcn Jul. 20, 2023, 50(7): 2798?2811 DOI: 10.13344/j.microbiol.china.220998 Copyright ?2023 Microbiology China All Rights Reserved 研究报告 研究报告 D,L-肽链内切酶基因 cwlO 缺失促进地衣芽孢杆菌 利用 L-谷氨酰胺合成聚 γ-谷氨酸 王思 1 ，李鑫*1 ，彭芳 1 ，刘军 1 ，占杨杨 2 ，陈守文*2 1 武汉轻工大学生命科学与技术学院，湖北 武汉 430023 2 湖北大学生命科学学院 省部共建生物催化与酶工程国家重点实验室，湖北 武汉 430062 王思 王思, 李鑫, 彭芳, 刘军, 占杨杨, 陈守文. D,L-肽链内切酶基因 cwlO 缺失促进地衣芽孢杆菌利用 L-谷氨酰胺合成聚 γ-谷 氨酸[J]. 微生物学通报, 2023, 50(7): 2798-2811. WANG Si, LI Xin, PENG Fang, LIU Jun, ZHAN Yangyang, CHEN Shouwen. Deletion of cwlO facilitates the L-glutamine utilization of Bacillus licheniformis for poly-γ-glutamic acid production[J]. Microbiology China, 2023, 50(7): 2798-2811. 摘 要： 【背景】聚 γ-谷氨酸(poly-γ-glutamic acid, γ-PGA)是一种由芽孢杆菌代谢产生的同质氨基 酸聚合物，在众多领域具有广泛的应用潜力。芽孢杆菌 cwlO 表达一种 D,L-肽链内切酶， 其对 γ-PGA 合成的影响机理尚不清晰。【目的】探究缺失 cwlO 对以不同前体发酵 γ-PGA 的影响及其机制。 【方法】以地衣芽孢杆菌 WX-02 为出发菌株，构建缺失 cwlO 的重组菌。在 3 L 发酵罐条件下对 比重组菌和野生菌利用不同前体发酵产 γ-PGA 的发酵性能，并通过转录水平差异分析、荧光倒置 显微镜观察、细胞壁肽聚糖含量和组分分析造成重组菌和野生菌发酵性能差异的原因。【结果】 缺失 cwlO 的重组菌对 L-谷氨酰胺的代谢利用效率显著提高，以 L-谷氨酰胺和 L-谷氨酸为混合前 体时，重组菌的 γ-PGA 产量达到 36.3 g/L，比野生菌高 48.8%。RT-qPCR 结果表明，相较于野生 菌， 重组菌在利用 L-谷氨酰胺时 γ-PGA 合成途径和呼吸链上关键基因转录水平均上调。荧光倒置 显微镜观察发现重组菌细胞形态相比野生菌变短变圆，细胞壁肽聚糖含量和组分测定发现， 重组 菌细胞壁肽聚糖含量降低， 且肽聚糖中蛋白质占比减少。【结论】地衣芽孢杆菌 cwlO 的缺失引起 细胞壁肽聚糖含量降低， 促进了菌株对 L-谷氨酰胺的利用， 强化了 γ-PGA 的合成，这为探究 cwlO 对 γ-PGA 合成的影响提供了新的思路和研究基础。 关键词： γ- 聚谷氨酸； cwlO； L-谷氨酰胺；地衣芽孢杆菌 资助项目：湖北省重点研发计划(2022BCA075)；武汉轻工大学科研项目(2022RZ027) This work was supported by the Key Research and Development Program of Hubei Province (2022BCA075) and the Research Funding of Wuhan Polytechnic University (2022RZ027). *Corresponding authors. E-mail: LI Xin, lixin084@163.com; CHEN Shouwen, chenshouwen@ Received: 2022-10-11; Accepted: 2022-11-14; Published online: 2023-01-03 王思等: D,L-肽链内切酶基因 cwlO 缺失促进地衣芽孢杆菌利用 L-谷氨酰胺合成聚 γ-谷氨酸 2799 Deletion of cwlO facilitates the L-glutamine utilization of Bacillus licheniformis for poly-γ-glutamic acid production WANG Si1, LI Xin*1, PENG Fang1, LIU Jun1, ZHAN Yangyang2, CHE