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金鱼保活运输技术研究进展 金鱼，又名椭圆形发育鱼(。 近年来，研究学者开展了金鲳鱼的冷冻与保鲜研究，但对其保活研究甚少，如金鲳鱼采用pH为5.6的二氧化碳麻醉液麻醉后离水保活，其存活时间仅为144 min。金鲳鱼幼鱼在丁香酚浓度为7 mg/L的条件下麻醉，低温密闭充氧保活运输8 h内，为降低鱼体运输应激与化学麻醉剂使用，采用梯度降温后低温休眠保活，延长其存活时间。金鲳鱼主要由于是一种暖水性海水鱼类，最适水温在20～34 ℃，捕捞后应激反应强烈，在低温（13 ℃）下易死亡，使保活运输困难 鱼类保活运输可分为有水保活运输和无水保活运输，在保活运输中会使用暂养、低温休眠、人工麻醉、运输装备、无水包装、环境控制、运输监控、唤醒等多种关键技术 1 材料和方法 1.1 蛋白质浓度、氨氮含量检测试剂盒 金鲳鱼（ 谷草转氨酶（Aspartate aminotransferase，AST）、葡萄糖（Glucose，GLU）、尿素氮（Blood urea nitrogen，BUN）、乳酸脱氢酶（Lactate dehydrogenase，LDH）、总胆固醇（Total cholesterol，T-CHO）、糖原（Glycogen，GLY）、乳酸（Lactic acid，LD）等检测试剂盒，南京建成生物科技有限公司；蛋白质浓度测定试剂盒，上海生工生物工程有限公司；皮质醇（Cortisol）检测试剂盒，上海酶联生物科技有限公司；水质总氨氮含量测定仪，解析科技（深圳）有限公司；生理盐水等。 1.2 仪器、试药与仪器 SG68便携式pH/离子/溶氧多参数测试仪，梅特勒-托利多国际贸易（上海）有限公司；MD5-100-G低温恒温循环槽，苏州吉米诺仪器有限公司；PR-100SA数显折射计（盐度计），广州市爱宕科学仪器有限公司；BJPX-150微生物恒温培养箱，山东博科生物产业有限公司；YC109便携式氨氮测定仪，解析科技（深圳）有限公司；Varioskan全自动酶标仪，美国ThermoFisher公司；UV-2550紫外可见分光光度计，日本岛津公司；JIDI-20R高速冷冻离心机，广州吉迪仪器有限公司。 1.3 实验方法 1.3.1 温度对金鱼的影响 将经过暂养6 h的金鲳鱼取出6条，分别放进盛有海水透明玻璃缸中，每个玻璃缸中1条，用低温恒温循环槽作为降温的冷源。当水温高于20 ℃时，以3 ℃/h的速率逐渐降温，当水温在16-20 ℃时，以2 ℃/h的速率逐渐降温。水温低于16 ℃时，以1 ℃/h的速率逐渐降温，观察和记录金鲳鱼在不同温度下的活动现象和呼吸频率，鱼鳃一张一合记呼吸频率1次，以金鲳鱼从呼吸规律到不规律甚至其呼吸极其微弱（但鱼体尚未死亡）时的温度作为金鲳鱼的临界温度。通过刺激鱼体观察是否有反应或者将鱼体放入其正常生活水中一段时间然后观察鱼鳃是否振动呼吸来判断鱼体的死活。 1.3.2 水温下降的速率 将暂养池中暂养6 h的金鲳鱼转移到同等水温的新鲜海水进行梯度降温，用低温恒温循环槽作为降温冷源。当水温高于20 ℃时，以3 ℃/h的速率逐渐降温，当水温在16-20 ℃时，以2 ℃/h的速率逐渐降温，水温低于16 ℃时，以1 ℃/h的速率逐渐降温。降温过程中持续供氧和水循环，保证氧气充足与水质适宜，观察金鲳鱼在逐渐降温过程中的活动现象，以呼吸速率较弱、活动能力弱、鱼体平躺作为适合保活的最佳状态。 1.3.3 保活时间测定 根据金鲳鱼的临界温度，在临界温度附近选取4个温度，在鱼水比为1:10的情况下记录相应温度下金鲳鱼的保活时间。每个温度下平行测试3次，每组实验8条鱼，计算24条鱼的平均存活时间作为相应温度下金鲳鱼的保活时间和每个温度条件下的存活率。 1.3.4 聚乙烯离心管密封 金鲳鱼保活过程中每隔8 h取海水，将海水置于50 mL的聚乙烯离心管中，并加盖密封。用F2手持pH计测海水pH值，用YC109便携式氨氮测定仪测海水中总氨氮含量，用SG68便携式离子/溶氧多参数测试仪测海水中的溶解氧。 1.3.5 血清中ast、ldh、皮质醇的检测 以未经梯度降温的活金鲳鱼为对照组，实验组分为保活0 h、保活24 h、保活48 h、复苏组。将保活过程中的金鲳鱼迅速从保活箱中捞出，放到150 mg/L的MS-222麻醉液中快速麻醉。用10 mL的注射器从金鲳鱼的尾静脉抽血，去掉针头将血液注入10 mL的离心管中，全血不加抗凝剂，在4 ℃放置2 h，待血液明显分层后以5000 r/min离心20 min，收集鱼的血清，置于-80 ℃的冰箱保存。分别用微板法、比色法、酶联免疫法测定AST、LDH、皮质醇；分别用葡萄糖氧化酶法、脲酶法、分光光度法测定GLU、BUN、TC。 1.3.6 糖原和乳酸测定 取鱼体的背部肌肉，用生理盐水漂洗后，再用滤纸吸干后冷冻保存，用试剂