耐药结核病诊断新技术演示文稿.pptVIP

乙胺丁醇 链霉素 氟喹诺酮 每个突变都表现出特有的谱线 对应独特的熔点, 软件可以自动地给出突变类型,即使发生不均一突变的情况,也可以分辨出来. 当前第31页\共有35页\编于星期四\8点 耐药结核病诊断新技术演示文稿 当前第1页\共有35页\编于星期四\8点 （优选）耐药结核病诊断新技术 当前第2页\共有35页\编于星期四\8点 全球范围内结核病疫情严重 患病率高： 新发患者1040万/年，其中有120万（11%）HIV患者； 死亡率高：每年死亡人数达140万（13.46%），HIV/TB:死亡人数40万（33.33%）； 耐药率高： 48万新发的MDR-TB病例和10万耐利福平结核病（RR-TB）病例； 接受MDR检测、报告和治疗的MDR-TB不足1/3，接受治疗的MDR-TB治愈成功率只有50% 2016年全球结核病报告 当前第3页\共有35页\编于星期四\8点 当前第4页\共有35页\编于星期四\8点 2015年全球估计MDR-TB患者数 当前第5页\共有35页\编于星期四\8点 结核病快速及时诊断是结核病防控重要因素 当前第6页\共有35页\编于星期四\8点 灵敏准确 操作简便 检测时间短 闭管检测 检测位点全面 对新型耐药检测技术的要求 当前第7页\共有35页\编于星期四\8点 当前第8页\共有35页\编于星期四\8点 基因芯片技术 当前第9页\共有35页\编于星期四\8点 结核病耐药与基因 64-68% rps L 基因突变 70% emb B基因突变 70% 65% 耐药 基因 93% 95% 95% rpo B基因突变 利福平 异烟肼 50-70% kat G基因突变 5-10% inh A基因突变 6-13% ahp C基因启动子区域突变 链霉素 乙胺丁醇 多数研究报告提示：耐药的发生与结核杆菌的基因突变有关。总体上是基因一个或几个核苷酸突变（表现增加、缺失、替代），造成核苷酸编码错误致氨基酸错位排列，影响药物与靶位酶结合产生耐药 当前第10页\共有35页\编于星期四\8点 当前第11页\共有35页\编于星期四\8点 基因芯片（原理） 激光共焦扫描仪 软件判读 样品制备仪 杂交仪 基因芯片方法是基于结核杆菌的利福平和异烟肼耐药性相关的rpoB/katG/inhA的基因位点发生突变，通过PCR扩增、和固定于尼龙膜上的寡核苷酸探针进行杂交、扫描，检测荧光信号的有无，判断特定位点的突变情况和结核菌耐药性。 基因芯片仪和试剂获国家SFDA和欧盟CE认证 * 当前第12页\共有35页\编于星期四\8点 基因芯片法 当前第13页\共有35页\编于星期四\8点 当前第14页\共有35页\编于星期四\8点 利福平的耐药位点 当前第15页\共有35页\编于星期四\8点 MSM 耻垢分枝杆菌 MTC 结核分枝杆菌复合群 MTR 次要分枝杆菌 MIN 胞内分枝杆菌 MAV 鸟分枝杆菌 MGA 胃分枝杆菌 MKA 堪萨斯分枝杆菌 MSC 瘰疠分枝杆菌 MUA 母牛分枝杆菌 MCH 龟分枝杆菌龟亚种 MAB 龟分枝杆菌脓肿亚种 MSZ 苏尔加分枝杆菌 MMA 海/溃疡分枝杆菌 MXE 蟾蜍分枝杆菌 MDI 迪氏分枝杆菌 MFO 偶发/猪分枝杆菌 MGI 浅黄分枝杆菌 MSI 猿猴分枝杆菌 MTE 土分枝杆菌 MPH 草分枝杆菌 CC 质控点 MNO 不产色分枝杆菌 MGO 戈登分枝杆菌 同时鉴定MTC与21种NTM 当前第16页\共有35页\编于星期四\8点 非结核分枝杆菌 当前第17页\共有35页\编于星期四\8点 在国内4个省的4个地市级CDC进行了评估。 当前第18页\共有35页\编于星期四\8点 结核病和非结核的诊断 当前第19页\共有35页\编于星期四\8点 特 点 标本：菌株、涂阳痰标本 时间：约8小时 优点：高通量 灵敏度、特异度高 当前第20页\共有35页\编于星期四\8点 国家结核病参比实验室推荐建议 基因芯片可以用于: 可疑耐药结核病患者筛查,它有望代替利福平和异烟肼的传统药敏试验 推荐理由: 在我国获得注册证书； 国内研究显示其敏感性和特异性较好； 民族品牌 数据显示在我国具有可行性,符合成本效果； 可能使用层级: 地市和省级（医疗机构和疾病预防机构） 当前第21页\共有35页\编于星期四\8点 探针熔解曲线技术 当前第22页\共有35页\编于星期四\8点 工作原理 在一定环境下，DNA双链在其长度和序列一定时，Tm值也一定， 当发生错配时，Tm值下降，下降的幅度与发生错配的碱基数目、类型和位置有关。 ΔT