大鼠血管内皮细胞粘附分子1 （VCAM-1）ELISA试剂盒.docxVIP

大鼠血管内皮细胞粘附分子1 (VCAM?1)酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围： 96T 25|ig/L -800|ig/L 使用目的： 本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中血管内皮细胞粘附分子1 (VCAM-1) 含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠血管内皮细胞粘附分子1 (VCAM-1)水平。 用纯化的大鼠血管内皮细胞粘附分子1 (VCAM-1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被 单抗的微孔中依次加入血管内皮细胞粘附分子1 (VCAM-1),再与HRP标记的血管内皮细胞 粘附分子1 (VCAM-1)抗体结合，形成抗体■抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB显色。TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜 色的深浅和样品中的血管内皮细胞粘附分子1 (VCAM-1)呈正相关。用酶标仪在450nm波长 下测定吸光度(OD值)，通过标准曲线计算样品中大鼠血管内皮细胞粘附分子l(VCAM-l) 浓度。 试剂盒组成 1 30倍浓缩洗涤液 20ml X 1 瓶 7 终止液 6ml XI 瓶 2 酶标试剂 6ml X 1 瓶 8 标准品(1600gg/L) 0.5ml X I 瓶 3 酶标包被板 12孔X8条 9 标准品稀释液 1.5ml XI 瓶 4 样品稀释液 6ml X 1 瓶 10 说明书 1份 5 显色剂A液 6ml X 1 瓶 11 封板膜 2张 6 显色剂B液 6ml X 1/瓶 12 密封袋 1个 标本要求 .标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于?20℃保存，但应避免反复冻融 .不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。 操作步骤 .标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 800|ig/L 5号标准品 150111的原倍标准品加入150|J标准品稀释液 400|ig/L 4号标准品 150111的5号标准品加入150)11标准品稀释液 200|ig/L 3号标准品 150(11的4号标准品加入150(11标准品稀释液 100|ig/L 2号标准品 150^1的3号标准品加入150m标准品稀释液 50gg/L 1号标准品 150^1的2号标准品加入150111标准品稀释液 .加样：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50111,待测样品孔中先加样品稀释液40m 然后再加待测样品10可（样品最终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 .温育：用封板膜封板后置37c温育30分钟。 .配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸储水30倍稀释后备用 .洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此 重复5次，拍干。 .力n酶：每孔加入酶标试剂50可，空白孔除外。 .温育：操作同3。 .洗涤：操作同5。 .显色：每孔先加入显色剂A50|il,再加入显色剂B50可，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15分钟. .终止：每孔加终止液50可，终止反应（此时蓝色立转黄色）。 .测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。测定应在加终止 液后15分钟以内进行。 操作程序总结： 准备试剂，样品和标准品 计算 以标准物的浓度为横坐标，OD值为纵坐标，在坐标纸上绘出标准曲线，根据样品的 OD值由标准曲线查出相应的浓度；再乘以稀释倍数；或用标准物的浓度与OD值计算出标 准曲线的直线回归方程式，将样品的0D值代入方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数, 即为样品的实际浓度。 注意事项 .试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡15-30分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未 用完，板条应装入密封袋中保存。 .浓洗涤液可能会有结晶析出，稀释时可在水浴中加温助溶，洗涤时不影响结果。 .各步加样均应使用加样器，并经常校对其准确性，以避免试验误差。一次加样时间最好 控制在5分钟内，如标本数量多，推荐使用排枪加样。 .请每次测定的同时做标准曲线，最好做复孔。如标本中待测物质含量过高（样本OD值 大于标准品孔第一孔的OD值），请先用样品稀释液稀释一定倍数（n倍）后再测定，计 算时请最后乘以总稀释倍数（XnX5）。 .封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。 .底物请避光保存。 .严格按照说明书的操作进行，试验结果判定必须以酶标仪读数为准. .所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。 .本试剂不同批号组分不得混用。 .如与英文说明书有异，以英文说明书为准。 保存条件及有效期 .试剂盒保存：