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梨品种ssr分子身份证的构建 中国是梨的主要起源之一。梨品种丰富。许多地方品种仍然是许多梨产区的主要品种。近年来, 我国梨产业获得了快速发展, 新品种选育推广速度加快, 大量优良品种被应用于生产 传统的形态学品种鉴定方法无法高效地鉴别大量的品种。分子标记技术不受环境条件、表型、植物组织、生长发育阶段等的影响, 为植物品种鉴定提供了准确、可靠的技术手段 1 材料和方法 1.1 材料表面 供试124份梨种质的幼嫩叶片于2016年4月采自中国农业科学院郑州果树研究所梨资源圃 (见表1) 。 1.2 pcr扩增类 试验在中国农业科学院郑州果树研究所综合实验室进行。采用改良CTAB法提取DNA 从已报道 PCR反应体系为20μL, 含10×PCR Buffer (Mg PCR反应程序如下:94℃预变性5min;94℃变性30s, 退火30s, 72℃延伸45s, 30个循环;72℃延伸10min;10℃保存。 1.3 读取片段大小 PCR产物送北京阅微基因技术有限公司进行毛细管电泳检测, 用Gene mapper ID v3.2软件 (Applied Biosystems, USA) 读取片段大小。纯和位点的基因型数据记录为X/X, 杂合位点的基因型数据记录为X/Y (XY) , 缺失记录为-/-。 1.4 sr特征的指纹数据表和分子签名的构建 利用Excel软件按照薛华柏等 2 结果与分析 2.1 基因型的筛选 25个SSR位点按照基因型数目从多到少可排序为Pb2L5N03978、Pb4L11N0673、Pb2LUN23926、Pb2L5N04728、Pb2L2N01186、Pb2LUN23511、Pb2L2N00842、Pb2L11N19979、Pb2L17N16340、Pb2LUN24633、Pb2L2N00685、Pb2L7N06398、Pb3LUN7415、CH03g07、Pb3L15N4181、Pb3L17N4741、Pb3L8N5448、Pb3L3N4999、Pb3L17N4804、Pb3L5N1095、Pb3LUN6569、Pb4L1N0014、Pb3LUN7727、Pb3L9N2234、Pb3L5N1305, 在124个梨品种中分别有69、63、62、61、58、57、56、56、55、53、52、51、48、43、40、39、37、36、34、34、32、31、31、27、21个基因型。 2.2 供试引物的高多态性 进一步分析发现, 供试25个SSR位点中区分品种能力最强的Pb2L5N03978能够单独区分43个品种, 而区分能力最弱的Pb3LUN7727、Pb3L9N2234、Pb3L5N1305等3个位点分别能够单独区分8个品种 (见表3) 。除了“张掖长把”和“兰州长把”, “巍山红雪梨1号”和“巍山红雪梨2号”, “火把梨”“晚熟火把梨”和“祥云火把梨”, “弥渡小红梨”和“祥云小红梨”等4组共9个品种无法区分开以外, 其余115个品种可被区分。在可被区分的115个品种中, “捷1”“茄梨”“保利阿斯卡”“安梨”“大酸梨”“蜜梨”“洋红宵”“红宵梨”“八里香”“满园香”“临夏香把”“林夏窝窝果”“红金瓶”“红蓓蕾莎”“Silk Red”“它西阿木特”等16个品种必须由不同位点的SSR引物加以组合进行区分;“福安尖把”“小香水”“黄山”等其余99个品种各自至少在1个SSR位点上拥有特征基因型, 仅用一对引物即可区分, 充分体现了供试引物的高多态性特点。这99个品种中, “若光”“冬果梨”“大叶雪”“砀山酥梨”“库车阿木特”“花长把”“水红宵”“贵德长把”“沙伊东黑酸梨”“罗莎”等10个品种仅在1个SSR位点拥有特征基因型, 另外89个品种在2个以上的SSR位点拥有唯一的特征基因型, “杜霞西”最多, 在14个SSR位点拥有唯一的SSR特征基因型。 2.3 ssr引物筛选 25个SSR位点经过排序优化后, 发现可以用Pb2L5N03978、Pb4L11N0673、Pb2L2N01186、Pb2L11N19979、Pb2LUN24633、Pb2L2N00685、Pb3L8N5448、Pb3L5N1095和Pb3LUN6569等9对SSR引物将除上述“张掖长把”和“兰州长把”等4组共9个未能被区分的品种外的其余115个梨品种区分开。在这9对引物中, Pb2L5N03978首先区分了43个品种, Pb4L11N0673接着区分了41个品种, 之后Pb2L2N01186区分了14个品种, Pb2L11N19979区分了4个品种, Pb2LUN24633区分了5个品种, Pb2L2N00685、Pb3L8N5448、Pb3L5N1095和Pb3LUN6569则分别区分出了2个品种 (见表4) 。 2.4 分子身份证号码