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火炬松中高质量rna的提取及生物合成通路的表达分析 产于美国东南部的火炬树(。 1 结果与分析 1.1 总rna的提取 本研究中，采用了改良的CTAB法提取火炬松各组织部位的总RNA。以PCR和1%琼脂糖凝胶电泳检测总RNA。提取的总RNA的28S和18S条带清晰且亮度高，28S条带的荧光亮度约为18S的2倍左右，总RNA提取效果好。利用核酸快速测定仪对提取的5年生火炬松各组织部位的总RNA样品的纯度和浓度进行检测，火炬松各组织部位样品的得率高，总RNA样品质量好，符合后续实验要求。 1.2 类化合物生物合成通路的鉴定 为了研究MEP和MVA途径相关基因在火炬松不同组织器官中的时空表达特性和萜类化合物对针叶树种的防御机制，分析了萜类化合物生物合成通路中已在火炬松转录组测序中组装到的13个相关酶基因( 位于MVA途径的基因 而在7个萜烯类化合物合成酶基因中， 1.3 南方松脂采集部位类化合物合成酶基因表达谱 本研究所选的20个萜类化合物生物合成酶基因在5年生火炬松中在松针组织中的表达水平显著高于树皮组织，而中国南方松脂采集部位主要是松属树种的树干部位，树木年龄为10年生以上。为了研究萜类化合物合成酶基因在不同林龄的火炬松组织中表达是否具有差异，选择了15年生火炬松中6个萜类化合物生物合成酶基因和7个萜烯化合物合成酶基因的表达谱进行分析(图3)。结果表明，13个基因在松针组织中的表达水平均显著高于次生木质部组织，特别是 2 推动阳离子表面活性剂检测 高质量RNA的提取是进行植物分子生物学方面研究的前提。火炬松中含有较难去除的多糖、多酚类物质，这为火炬松高质量RNA的提取带来了一定的困难。已有许多植物材料使用CTAB作为阳离子表面活性剂成分分离出高质量的RNA，如：用改良CTAB法提取百合鳞片的总RNA带型清晰，完整性好( 植物萜类化合物在植物组织次生代谢中具有非常重要的作用，并被广泛应用于医药、工业生产等行业。虽然萜类化合物数目繁多、结构和功能各异，但它们都由共同的结构前体物质IPP和DMAPP合成。大多数生物仅使用其中一个通路合成萜类化合物的前体物质，如：酵母、古细菌和动物仅使用MVA途径，蓝藻细菌、绿藻类和大部分革兰氏阴性细菌只使用MEP途径，而高等植物和部分藻类能同时使用MVA和MEP两种途径合成萜类化合物的前体物质( 3 材料和方法 3.1 火炬松与生非火炬松生长性状对比试验 本研究分别以生长环境一致、无病虫害的3株5年生和15年生火炬松为材料，在2018年8月分别对5年生火炬松的成熟叶、嫩叶、芽、树皮、根5个部位(图4)及15年生火炬松的松针和树皮取样。 3.2 火环松各组织部位的总氮含量 火炬松总RNA的提取参考了 3.3 实时荧光定量pcr分析 总RNA样品的反转录反应则根据反转录试剂盒PrimeScript 3.4 差异分析的过程 用IBM SPSS Statistics 23软件进行差异分析，通过Excel 2003软件计算出各基因表达量的平均值与方差，并制作图表。 数据整理与论文写作 曾韦珊是本研究的实验设计者和实验研究的执行人；曾韦珊、毛积鹏参与数据整理及论文初稿的写作；黄林旺、冯志恒、刘蒋建雄天颐参与部分实验；黄少伟是项目的负责人，指导实验设计、数据统计、论文写作与修改。全体作者都同意最终的文本。