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怀菊花总黄酮对自发性高血压大鼠的降压作用及其机制 高血压是一种常见的心血管疾病。目前，中国约有2亿高血压患者。 1 材料和机器 1.1 实验动物国际专利 雄性自发性高血压大鼠(简称SHR)50只:SPF级,12周龄,体重232 ~ 292 g,购自北京维通利华实验动物技术有限公司,许可证号:SCXK( 京实验动物合格证:NO. 11000500000131。雄性WKY大鼠12只,SPF级,12周龄,体重272 ~ 302 g, 购自北京维通利华实验动物技术有限公司,许可证号:SCXK ( 京) 2012-0001,实验动物 合格证: NO. 11000500000132。饲养室温25 ℃ ,空气湿度50% ~ 70% ,每3 ~ 5只大鼠一笼,大鼠可自由走动并摄取标准饲料与自来水,光线暴露:自然长度的昼夜循环。 1.2 总黄酮含量测定 药材为河南焦作产怀菊花,经河南省中医药研究院中药室张留记研究员鉴定均为菊科植物菊 (Chrysanthemum morifolium Ramat. ) 的干燥头状花序。取怀菊花药材置于圆底烧瓶中,加入80% 乙醇加热回流提取两次,每次1 h,合并滤液,回收乙醇, 浓缩,加乙酸调至p H 2左右,用乙酸乙酯1∶ 1萃取两次,合并乙酸乙酯提取液,用40% 氢氧化钠溶液调至p H 7左右,回收乙酸乙酯,浓缩,减压干燥。紫外分光光 度法测定 提取物中 总黄酮含 量为41. 35% 。提取物用0. 5% 羧甲基纤维素钠 (0. 5% CMC-Na) 水溶液溶 解,配成质量 浓度为0. 0205、 0. 041、0. 082 g / m L的混悬液。马来酸依 那普利片 (扬子江药业集团江苏制药股份有限公司,批规格10 mg,用0. 5% 羧甲基纤 维素钠 (0. 5% CMC-Na) 水溶液溶解,配成质量浓度为2 mg / m L的混悬液) ;ET放射免疫试剂盒、AngⅡ放射免疫试剂盒、ALD放射免疫试剂盒、PRA放射免疫试剂盒( 试剂盒均购自上海酶联生物科技有限公司)。 1.3 血压仪u3000t 超声波提取器( 济宁科技超声电子有限公司GT-350 W ) ; 万分之一 天平 ( 日本岛津LIBROR160DPT) ;十万分之一天平( 瑞士METTLER) ;Acs-6型电子秤(永康市杰力衡器有限公司);紫外分光光度计 ( 日本岛津); 智能无创 血压计—鼠仪BP2010A( 日本Softron柱式会社) ; ELx808型酶标仪 (美国伯腾仪器有限公司);GC-300型 γ 放射免疫计数器(天津汇科仪器设备有限公司)。 2 实验方法 2.1 大鼠单次用药,多次给药 将周龄为12周的50只SHR大鼠适应性喂养1周后,连续2 d测量大鼠血压,将2 d的血压取均值, 然后按照大鼠血压值均衡随机分5组,分别为:模型组(0. 5% CMC-Na 10 m L/kg)、依那普利组(20 mg / kg) 、怀菊花总黄酮高剂量组(0. 82 g / kg) 、怀菊花总黄酮中剂量组(0. 41 g /kg)、怀菊花总黄酮低剂量组 (0. 205 g /kg)每组10只。另取10只WKY大鼠为正常对照组(0. 5% CMC-Na 10 m L/kg)。各组喂食普通饲料,自由进水。各组大鼠每天灌胃给药1次, 剂量为10 m L/kg,连续给药4周。每周测量体质量1次,并根据体质量的变化调整给药量。 2.2 保温套和保温套的制备 灌胃给药后,每周采用BP-2010A型智能无创血压计测定SHR大鼠尾动脉血压以及心率(测定血压前各组大鼠喂食标准饲料,自由进水)。测定血压时先将实验大鼠放入血压计配套的保温套中,并根据每只大鼠体型的不同调整鼠袋大小和形状,将大鼠稳稳固定。血压计需在40 ℃ 恒温下进行预热10 ~ 15 min,然后将大鼠加压感应器从大鼠尾尖部穿入直至尾根部,用于感应和测定尾动脉血压值,连续测3次,记录大鼠收缩压(SBP)、舒张压(DBP)和心率(HR)值,取尾动脉收缩压(SBP)平均值为该大鼠的血压值。 2.3 去血大鼠血样的制备 在给药第4周末,将大鼠禁食不禁水12 h后, 以10% 水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠,待动物麻醉后剖开腹腔经腹主动脉取血。血样经3000 rpm离心15 min,分离的血浆存放于-80 ℃ 冰箱备用。采用放射免疫法测定大鼠血浆中ET、AngⅡ、ALD和PRA的含量。 2.4 统计学处理方法 各组实验数据均用ue02b ± s表示,组间差异采用方差分析,两两比较 采用t检验,所有数据 均用SPSS17. 0统计软件处理,以P 0. 05和P 0. 01表示有统计学意义。 3 结果 3.1 单次给药后24小时的血压和心率的比较 3.1.1 sbp的