核酸物理化学性质课件.pptxVIP

核酸物理化学性质;一、核酸的水解;二、核酸的酸碱性质;;;2、核苷的解离 戊糖可增强碱基的酸性解离 核糖中的羟基也可发生解离 3.核苷酸的解离 磷酸基使核苷酸具有很强的酸性;; DNA等电点为4～4.5； RNA等电点为2～2.5 ;三、核酸的紫外吸收;核酸溶液紫外吸收以摩尔磷的吸光度表示，摩尔磷即相当于摩尔核苷酸。;OD260的应用： 1. DNA或RNA的定量 OD260=1.0相当于 50μg/ml双链DNA 40μg/ml单链DNA（或RNA） 20μg/ml寡核苷酸 2.判断核酸样品的纯度 DNA纯品: OD260/OD280 = 1.8 RNA纯品: OD260/OD280 = 2.0 含杂蛋白及苯酚，降低 3.判断DNA是否变性;四、核酸的变性、复性与杂交; 某些理化因素破坏了氢键和碱基堆积力， 使核酸分子高级结构改变、理化性质及 生物活性发生改变。 不涉及磷酸二酯键断裂，一级结构不变;降解：核苷酸骨架上3’，5 ’-磷酸二酯键的断裂; 高温（一般＞75℃）— 热变性 强酸、碱 — 酸碱变性 甲醛（Agarose中RNA ） 尿素（PAGE中DNA ） ; OD260增高 粘度下降 比旋度下降 浮力密度升高 酸碱滴定曲线改