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川楝子致小鼠肝毒性时效、量效关系研究 1 1.1 实验动物及其他 母蚕，18.20g，雌雄各半，上海斯乐克实验动物有限公司提供，证书号scxk（上海）2003-0003。饲养于上海中医药大学实验动物中心。 1.2 植物川吾子注射液的制备 川楝子原药材购于上海养和堂张江分店, 四川产, 批号051216, 经上海中医药大学中药学院赵志礼教授鉴定系为楝科植物川楝 川楝子药液的制备 (水提醇沉) :将药物粉碎呈颗粒状, 水煎3次。合并3次药液, 过滤, 浓缩, 加乙醇, 回收乙醇。将上述水提醇沉液浓缩至浓度为10 g/ml, 置冰箱, 保存备用。临用前, 用蒸馏水分别配成所需浓度的药液 (以下简称“川楝子”) 。 1.3 不符合试验标准的财产有 丙氨酸氨基转移酶 (ALT) 试剂 (批号060339) ;天冬氨酸氨基转移酶 (AST) 试剂 (批号051210, 均由上海丰汇医学科技有限公司提供) 。 1.4 全自动生化分析 AR2130电子天平 (奥豪斯国际贸易上海有限公司) ;全自动生化分析仪HITACHI7020 (日本HITACHI公司) ;系统显微镜BX51/BX52 (日本奥林巴斯光学株式会社) ;全能型脱水机 (徕卡公司) 。 2 对小鼠血清alt,ast的检测 2.1 口服半数致死量 (LD 2.2 口服“毒性时效”关系研究 取小鼠, 雌雄各半, 随机分为8组, 按处理时间点依次为0 (即正常组) , 1, 2, 6, 12, 24, 48, 72 h组。按0.4 ml/10 g灌胃1次, 0 h组小鼠灌服蒸馏水, 其余各组灌服188 g/kg川楝子。于相应时间点称量小鼠体重, 摘眼球取血, 血3 000 r/min离心10 min, 取血清, 以全自动生化分析仪测定血清ALT, AST。摘取小鼠肝脏、脾脏、胸腺, 称重并计算脏器指数 2.3 口服“毒性量效”关系研究 取小鼠, 雌雄各半, 随机分为6组, 即正常组和川楝子5个剂量组。按0.4 ml/10 g灌胃1次, 正常组灌服蒸馏水, 川楝子各剂量组分别灌服166, 81, 57, 40, 28 g/kg川楝子。1 h后, 按“2.2”方法测定血清ALT, AST, 计算脏器指数, 另取一部分肝组织, 用于观察组织形态学变化。 2.4 统计方法 使用SPSS 13.0统计软件Probit法计算LD 3 3.1 口服 3.1.1 给药后的一般情况 部分动物在给药后0.5～1 3.1.2 死亡情况 正常组小鼠死亡为0;川楝子各组按剂量从低到高的死亡数依次为0, 3, 5, 10。计算 3.2 口服“毒性结合”的关系 3.2.1 血清 给药后1～12 3.2.2 影响肝脏、脾脏和胸腺器官的指数 给药6 3.2.3 影响肝脏组织的形态 光镜下观察, 正常组肝小叶结构清晰完好, 肝细胞未见明显变性、坏死, 肝窦未见明显淤血扩张;给药24 3.3 口服“毒性量效”关系 3.3.1 血清 川楝子81, 166 3.3.2 影响肝脏、脾脏和胸腺器官的指数 川楝子166 3.3.3 影响肝脏组织的形态 光镜下观察, 正常组肝小叶结构清晰完好, 肝细胞未见明显变性、坏死, 肝窦未见明显淤血扩张;28 4 川吾子的急性毒性研究 对川楝子致小鼠肝毒性时效关系的研究显示:小鼠单次灌服188 对川楝子致小鼠肝毒性量效关系的研究显示, 小鼠单次灌服较高剂量的川楝子后, 可使血清 《名医别录》谓川楝子有小毒, 但临床应用仍很广泛, 现代对其毒性的研究较少。有临床研究表明消化道的不良反应大多在服药后1～2 由于川楝子临床上以汤剂口服为主, 为了能更安全地应用, 了解其口服毒性特点, 对其进行毒性研究显得尤为必要。本实验以川楝子水提醇沉液为研究对象, 对其肝毒性的时效、量效进行了初步研究, 关于其肝脏损伤的机制我们将进行进一步的研究。