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气虚血瘀大鼠模型表征及血液流变学的动态观察 气虚血瘀证是许多临床疾病中的常见症状，尤其是老年人神经疾病。中国已经进入老龄化社会，关于气虚血瘀证的研究已成为中医学领域的一个难题。多年来, 学者们一方面结合中风病、冠心病、高血压等临床常见疾病从证类出现频率、证候特征与诊断、临床疗效评价等宏观角度对其进行了系统研究, 初步建立了临床诊断与疗效评价方法。另一方面, 从血液流变学、血管调控物质、组织形态改变等微观角度对其生物学基础做了有益探索, 为科学阐明其生物学实质奠定了基础。 临床研究中, 经历数千年的整理与总结, 中医证候学形成了一套以中医望、闻、问、切为基本信息采集方法的完备体系, 这一体系经由临床反复验证, 具有了较高的稳定性和科学性。与之相对, 生物学基础研究多是基于不同疾病、不同造模方法和不同的微观指标进行的, 缺乏与中医临床证候拟合程度衡量标准, 造成其科学性和稳定性难以评价, 成为困扰研究深入的一大难题。因此, 探索生物学基础研究与临床证候研究的相关性及其评价方法成为当务之急。 通过总结前人思路及方法, 笔者提出了气虚血瘀证动物表征研究的新思路, 并拟定了相关的表征体系。以此为依据, 本实验结合“劳则气耗”中医理论, 以力竭游泳为主要造模手段, 造成气虚血瘀大鼠模型, 在此基础上, 根据自拟表征体系进行动态观察, 检测模型大鼠相关血液流变学指标变化, 探索证候生物学基础及动物模型研究的客观评价方法。 1 材料和方法 1.1 实验动物的饲养 健康成年雄性SD大鼠60只, 体质量 (200±10) g, 由维通利华实验动物研究所提供。于实验前1周购进实验动物, 安静环境分笼饲养, 温度控制在 (25±1) ℃, 相对湿度为60%, 自由摄入水食。随机分成正常组、模型组, 30只/组。每组大鼠分别再分成1周、2周、4周组, 10只/组, 同时点两组间相互对照。 1.2 适应游泳环境 模型组大鼠于造模前1周进行游泳训练, 隔日1次, 2~3 min/次, 使之适应游泳环境。实验过程中, 正常组给予普通饲料进食, 模型组给予普通饲料加力竭游泳造模, 每周第1~5天进行力竭游泳造模, 建立气虚血瘀大鼠模型, 力竭标准控制为大鼠沉入水中10 s不能自行浮出水面。 1.3 实验大鼠一般情况及电生理指标检测 模型组及正常组以力竭游泳的最后1周为检测周, 集中进行相关表征及血液流变学检测。于每周星期一、星期四两天观察皮毛色泽、爪甲颜色、精神状态等一般状况。同时测量大鼠体质量、平均进食量变化。造模期间记录大鼠每天游泳时间, 计算各周的平均游泳时间。水迷宫实验采用DMS-3 Morris水迷宫 (中国医学科学院药物研究所) 。旷场分析于检测周第6天进行, 记录中央格停留时间、水平运动次数、垂直运动次数等数据。检测周第7天对大鼠麻醉状态下进行舌质评分, 评分标准自拟, 同时拍摄舌图, 采用富士数码照相机 (Fine Pix S9500, 900万像素) 。复合电生理检测采用BIOPAC-MP150型16导联多功能电生理仪, 分别检测心率、呼吸频率、大鼠前肢末端皮肤温度。通过以上表征检测, 尝试较为全面反映大鼠气虚血瘀状态。 1.5 统计学处理 对相关数据使用SPSS11.5软件进行统计学处理, 计数资料采用t检验, 等级资料采用单因素方差分析, 血液流变学指标采用单因素方差分析, 实验结果以均数±标准差 2 气虚血瘀模型与大鼠相关 2.1 单次力竭大鼠的反应 单次力竭指在造模过程中, 模型大鼠单次游泳所要达到的力竭标准及其表现。单次力竭后大鼠表现为目光呆滞, 呼吸喘促, 左右摇晃, 无摇头甩水现象, 无力反抗、理毛, 站立不稳, 一触即倒, 见图1。单次游泳均使大鼠达到力竭, 保证了造成气虚的施加因素持续存在。 2.2 慢性疲劳 慢性力竭指模型大鼠在经过多次力竭游泳后, 表现出较为稳定、能够一定程度反映证候特征的宏观表征, 主要包括以下方面。 2.2.1 气虚的表现 经过长期的力竭游泳后均表现出精神状态差、活动减少、体质量下降、运动能力差、懒动等气虚相关表征。 2.2.1. 运动轨迹型 健康大鼠表现灵活, 眼光有神, 反应迅速, 被毛光泽, 爪甲红润光泽。力竭游泳造模后大鼠无精打采, 眼微睁无神, 自主活动少, 对外界反应迟钝, 被毛黯淡枯燥, 爪甲色淡。与气虚证机体失养、神疲症状相对应。 2.2.1. 不同密度的耦合数据 正常组分别为28.4、26.3、25.1 g, 模型组分别为27.5、28.6、28.4 g, 见图2。可见正常组大鼠进食量逐渐下降, 与之相对, 模型组大鼠进食量有所增加, 可能与大鼠的力竭游泳导致能量消耗增加有关。 2.2.1. 体质量和指数 模型组大鼠体质量增长缓慢, 抓挠动作少、动作迟缓, 2周、4周的体质量均低于