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藻类诱变育种技术及其应用 藻类是水生生态系统的主要原型，在整个生态系统中发挥着重要作用。它们在世界范围内的碳固定和环境恢复中发挥着非常重要的作用。同时藻类与人类生活及经济发展也有着密切的关系,藻类分布广泛且具有多样性,许多藻类富含蛋白质、维生素、微量元素以及各种生物活性物质等,是人类的重要营养源,是人类发展“蓝色农业”的基础。 随着藻类养殖规模的不断扩大,种质成了决定养殖质量和产量的关键问题。应用传统的育种方法如选择育种、杂交育种等,培育出了一系列的优良品系或品种,推动了我国海藻养殖业的发展。然而传统育种具有育种周期长、性状不稳定等缺点,限制了藻类遗传育种的研究进展。藻类诱变育种技术是近些年随着生物技术发展起来的育种技术,它是指利用各种物理和化学因素诱发藻体产生遗传变异,再根据育种目标,定向选择、培育新品种,同时获得有价值的突变藻体的育种方法 诱变育种技术根据不同作用机理,主要包括物理诱变和化学诱变。物理诱变是通过不同的辐射源对植物进行电离或非电离辐射,是一种应用比较早、操作方便、诱变频率较高的诱变技术;化学诱变是利用化学诱变剂诱导植物发生突变,具有成本低、使用方便、诱变作用专一性强等特点,是一种迅速发展的育种方法。本文就这两类诱变技术的诱变机理、生物学效应以及在藻类育种中的应用情况进行了综述,并对藻类诱变育种的应用前景进行了展望,以期为藻类诱变育种研究提供参考。 1 超声检测手段 物理诱变辐射源有紫外线、X射线、γ射线、α射线、重离子束、超声波和激光等。其中对藻类诱变效果好,应用较广泛的有紫外线、X射线、γ射线和离子束。 1.1 吡啶二聚体是致突变的第层次 紫外线是一种非电离辐射,是使用最早、沿用最久、应用最广泛的一种物理诱变剂。紫外线可引起DNA与蛋白质的交联、胞嘧啶与尿嘧啶之间的水合作用、DNA链的断裂、形成嘧啶二聚体等,从而导致基因突变。而形成嘧啶二聚体是产生突变的主要原因;嘧啶二聚体不仅可以由单链上相邻的两个胸腺嘧啶之间反应后形成,也可以产生于双链相对应的两个胸腺嘧啶之间 紫外诱变因为其设备简单、操作方便,而且成本低、安全性高等特点,得到了广泛的应用,成为诱变育种的首选方法。紫外线诱变在微藻育种中应用的比较多,获得了大量具有优良性状的突变藻株,具有较好的诱变效果 在大型海藻育种中也有紫外诱变研究的报道,但是由于紫外线对藻体组织的穿透能力有限,通常是用藻体的原生质体、孢子、配子或幼嫩的叶状体做为材料进行诱变 1.2 位等染色体畸变藻类的诱导育种 射线辐射源包括X射线、γ射线、α射线或β射线等。辐射可以造成共价键断裂,引起DNA链的断裂,当修复时不能恢复到原状就会产生突变。如果射线击中染色体则可能导致断裂,再修复时会造成缺失、重复、倒位和易位等染色体畸变 藻类辐射育种早期主要以X射线为诱变源,后期γ射线、α射线和β射线等其他射线辐射应用逐渐增多。20世纪70年代培育出的海带新品种1170是经过4 000 r的X射线处理后,又经过筛选和自交获得的品系,含碘量较高,叶片较厚,适温性较高 γ射线具有很强的穿透力,是目前藻类育种中最常使用的辐射诱变源之一。Choi等 条斑紫菜和坛紫菜是我国大规模养殖的经济品种,紫菜色素含量的高低决定着商品紫菜质量的好坏,同时色素突变体对于紫菜的遗传学,生理学和育种学等方面的研究,以及对于养殖品种的改良都具重大意义 除了色素突变体的研究,在紫菜抗逆速生新品种的诱变遗传育种方面,也取得了一定的成果。陈昌生等 1.3 重离子束辐照 针对传统辐射源的突变频率较低和突变随机性较大等问题,人们又发掘和利用了新的诱变因素及诱变技术,其中重离子辐射技术发展迅速。重离子束具有传能线密度(Linear energy transfer,LET)高的特点,与X射线、γ射线、电子束等低LET方法相比,重离子束单位剂量的诱变效率要高10倍,已经在微生物及植物诱变育种中取得了巨大的经济与社会效益。重离子束辐照主要是引起DNA链发生各种断裂及交联,进而诱发细胞突变 近些年重离子束辐射在微藻育种中主要应用在产油微藻方面。王芝瑶等 在紫菜和海带中也有重离子束辐射诱变的研究,显示出其在大型海藻中的应用潜力。Niwa等 1.4 a,agp 常压室温等离子体(Atmospheric and room temperature plasma,ARTP)作为一种新兴的高效生物突变手段,具有放电均匀、活性粒子浓度高、化学活性物种可调控性好、操作简单、安全性高、环境友好、突变速度快、突变率高及突变多样性大等特点 等离子体的主要组分是高浓度的活性粒子,能够穿透细胞壁和细胞膜,破坏DNA分子,引起突变,从而改变目标生物的代谢途径 2 突变指导思想 目前烷化剂是藻类诱变育种中最有效和应用最多的化学诱变剂。这类诱变剂具有一个或多个活性烷基,它们易取代D