DB64 765_2012动物包虫病防治技术规范.pdf

ICS 65. 020. 30B 41DB64宁夏回族自治区地方标准DB 64/T765—2012动物包虫病防治技术规范2012-03-20发布2012-03-20实施宁夏回族自治区质量技术监督局发布 DB64/ T 765—2012前言本标准的编写格式符合GB/T1.1-2009《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》的要求，本标准由宁夏回族自治区农牧厅提出并归口，本标准由宁夏回族白治区动物疾病预防控制中心起草。本标准主要起草人：王进香、李知新、王晓亮、杨春生、周海宁、马军、玉贵萍。 DB64/ T 7652012附录C（规范性附录）犬细粒棘球终虫病类抗原ELISA检测操作规程C. 1适用范围此操作规程适用于犬细粒棘球终虫病类抗原的检测。C. 2试剂配制C. 2. 1稀释液（0.02MPH7.4PBS）A. Ns,JIPO., 12H,0 (M=358, 14)2. 9gB. NaH,HPO, 2HL0 (MI=156. 01)0. 3gC. NaC1(M=58. 44 )4. 5gD.蓝端水加至 500alLC. 2. 2洗液A. NaJIPO. 12H,0(M=358, 14)11. 6gB. NaFLHPO. 2H0(M=156. 01)1. 28C. NaC1(M=58. 44)18. 0gE, 吐鼠2010. 0 sL.D.蓝馏水加至 2000. 0 mlLC. 2. 3底物缓冲液A, Na,HP0, 12H,0 (M358, 14)3. 6gB, CHO. R,0(M=210. 14)1. 0gc.蒸墙水加至 200nl,C. 2. 4终止液（2MH,SO.）H.S0.12.5ml.加入100.0mL蒸增水中，混匀。C. 3操作步骤C. 3. 1包被用稀释波将抗成虫的单抗试剂1:100稀释，100μL/孔，4C过夜。C. 3. 2洗板用洗液连续洗板4次， DB64/ T 7652012C.3.3加样加经过-80℃1周或液氮1周处理的犬类样离心上清100μL/孔，37℃30min。同时做阴性4孔，阳性1孔，样品稀释液1孔，C.3.4洗板用洗液连续洗板4次。C.3.5加单抗标记物用含10%小牛血清的稀释液将抗成虫的单抗标记物试剂1:100稀释，100μL/孔，37C孵育30min。C.3.6洗板用洗液连续洗板4次，C. 3. 7加底物在底物缓冲液中分别加入1:100TMB和1:100H:0.混勾后100uL/孔，37C孵育30min。C.3.8终止每孔加50μL终止液。C.3.9测定0D值用酶标仪测定0De/吸光值。C. 3. 10结果判定待测样本0D值（P）/朗性对照OD值的均值（N）≥2.1者为阳性。C.4注意事项：C. 4. 1类抗原检测时，类样必须经过-80℃1周或液氮1周冷冻处理，杀死虫卵，C. 4. 2酶标板洗涤时各孔均需加满洗液，防止非特异性抗体、游离酶残留。C.4.3加样时应先加样品，再加4孔阴性对照、1孔阳性对照、1孔稀释液对照，整个加样过程应在15min内完成。C.4.4终止液为2硫酸，使用时应注意安全。C.4.5操作应按说明书严格进行，不同批次试剂不得混用。C.4.6每次试剂盒结果判定必须用该板阴性对照的均值，不能用于其它试剂盒结果判定。10 DB64/ T 7652012表C.1犬细粒辣球练虫粪抗原检测统计表调查地点：县多村(队)调查时间：年月日调查人：犬主犬况采样感染强度体型饲养方式各注姓民职数犬号年品毛典抗原ELISA检测名族业(份)龄种色大中小栓养散养阳性数（条）(%)注：1.年龄按月龄填写：2.体型：大：20kg以上；中：10kg以下。小：增乳期；用y”符号表示；3.检查方式：粪抗原ELISA检测，11 DB64/ T 7652012动物包虫病防治技术规范1范围本标准规定了动物包虫病防治技术规范的术语和定义、基线调查、防控、建档。本标准适用于对牛、羊、猪包虫病和犬细粒棘球综虫病的防治。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的，凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T18635-2002动物防疫基本术语3术语和定义GB/T18635-2002规定的以及下列术语和定义适用于本标准。3. 1包虫病由棘球缘虫的幼虫-棘球够寄生于哺乳动物的脏器内引起的一种人畜共患的寄生虫病。3. 2监测对某种疾病的发生、流行、分布及相关因素进行系统的长时间的观察与检测，以把握该疾病的现状及发生发展趋势。3. 3基线调查防治前，对防治效果考核涉及的参数及指标进行基础情况调查。3. 4无害化处理用物理、化学或生物学方法处理带有或疑似带有病原体的动物体、动物产品或其它物品，达到消灭传染源，切斯传据途径，破