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SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2497.27—2010进出口危险化学品安全试验方法第27部分:流式细胞术检测凋亡Test method of import and export dangerous chemicals-Part 27 : The usage of flow cytometry in apoptosis2010-03-02发布2010-09-16实施中华人民共和国B发布层送器107810 查试具伤国家质量监督检验检疫总局数码防伪“
SN/T 2497.27—2010前 言SN/T2497《进出口危险化学品安全试验方法》系列标准共分为29部分:第1部分:体内哺乳动物肝细胞程序外DNA合成(UDS)试验;第 2 部分:空斑形成细胞(PFC)试验;第3部分:大型泽繁殖试验;第4部分:酿酒酵母有丝分裂重组试验;第5部分:睾丸细胞UDS试验;第6部分:哺乳类动物细胞姐妹染色单体互换体外试验;第7部分:小鼠耳肿胀试验;第8部分:胭窝淋巴结试验;第9部分:血清溶血素测定试验;第10部分:T淋巴细胞增殖功能测定试验;第11部分:种系突变试验;第12部分:单细胞凝胶电泳分析试验;第13部分:荧光原位杂交试验;第14部分:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳试验;第15部分:PCR-SSCP实验;第16部分:Western-Blot实验;第17部分:哺乳动物行为毒理学试验;第18部分:DNA加合物的检测方法;第 19 部分:Northern Blot实验;第20部分:Bradford法测定蛋白质含量;第21部分:琼脂糖凝胶电泳试验;第 22部分:DNA的 Tm 值测定方法;第23部分:细胞器的分离实验方法;第24部分:细胞免疫功能体外检测方法;第25部分:体液免疫功能试验;第26部分:巨噬细胞功能试验;第27部分:流式细胞术检测凋亡;-第28部分:穿梭质粒在突变检验中的应用;第29部分:生化需氧量(BOD)测定。本部分为 SN/T 2497系列标准的第 27部分本部分修改采用《毒理学实验方法与技术》中的流式细胞检测方法,其有关技术内容与上述方法完全一致,在标准文本格式上按GB/T 1.1做了编辑性修改。本部分的附录 A为资料性附录。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分负责起草单位:中华人民共和国天津出人境检验检疫局、中华人民共和国湖南出人境检验检疫局。本部分主要起草人:冯智勐、王利兵、王华、李学洋、刘伟、丁宇。本部分系首次发布的出入境检验检疫行业标准。
SN/T 2497.27—2010进出口危险化学品安全试验方法第 27部分:流式细胞术检测凋亡1范围SN/T 2497的本部分规定了进出口危险化学品流式细胞术检测凋亡的术语和定义、试验方法和结果分析。本部分适用于进出口危险化学品流式细胞术检测调亡的试验。2术语和定义下列术语和定义适用于本部分。2. 1凋亡apoptosis也称为“程序性细胞死亡”,是一种细胞受环境刺激后,在基因调控之下所产生的自然死亡现象。调亡最初由特征性的形态变化来确定,包括:DNA的程序性降解、染色质浓缩、细胞缩小和碎裂。它可以是生理性的,或由化疗药物及放射诱发。2.2坏死necrosis活体内局部组织、细胞的死亡称为坏死。坏死组织细胞的代谢停止,功能丧失。坏死的形态变化可以是由损伤细胞内的水解酶的降解作用引起,也可以由游走来的白细胞释放的水解酶的作用引起。2.3流式细胞术flow cytometry是用流式细胞仪测量液相中悬浮细胞或微粒的物理性质及化学性质,如细胞大小、内部结构、DNA、RNA、蛋白质、抗原等进行快速测定并可分类收集的一种现代分析技术。3试验方法3.1仪器设备流式细胞仪;普通低速离心机;漩涡混匀仪;微量加样器。3.2试剂和耗材-Annexin V/PI试剂盒(含荧光标记的 Annexin V,PI 和 Binding Buffer);-200目过滤尼龙网;-0.22um的滤膜;-PBS缓冲液(pH一7.4)和蒸馏水(用滤器滤过);-流式细胞仪的保养试剂;加样枪头。试剂如自行配置,PBS和 Bingding Buffer 和 PI 的配置可以参见附录 A。
SN/T 2497.27—20103.3试验步骤3.3.1细胞悬液的制备试验所用细胞可来源于各种组织也可为直接培养的细胞。若细胞来源于组织,需将其充分分离,并用200目尼龙网过滤,收集细胞悬液。将细胞用PBS缓冲液洗涤两次[(500~800)r/min,5min/次],调整细胞浓度为1×106 个/mL。3.3.2分组根据试验目的进行分组。要包含对照组,包括未标记的细胞、仅用 Annexin V标记的细胞,仅用 PI染色的细胞。染色(如果使用试剂盒,加入试剂的剂量可以按说明书进行)3.3.3取 100 μL(1×105
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