SN_T 3423-2012黄瓜黑色根腐病菌检疫鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3423—2012黄瓜黑色根腐病菌检疫鉴定方法Detection and identification of Phomopsis sclerotioides van Kesteren2012-12-12发布2013-07-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局蓝全动 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准黄瓜黑色根腐病菌检疫鉴定方法SN/T3423—2012*中国标准出版社出版北京市朝阳区和平里西街甲2号（100013）北京市西城区三里河北街16号（100045）总编室：（010址中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本880×12301/16印张1字数26千字2013年6月第一版2013年6月第一次印刷印数1-1600*书号：155066·2-252733定价18.00元 SN/T 3423—2012前言本标准按照GB/T1.1--2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国宁波出人境检验检疫局、中华人民共和国浙江出人境检验检疫局、中华人民共和国广东出入境检验检疫局、中国计量学院。本标准主要起草人：张慧丽、张建成、陈先锋、徐瑛、杨红霞、商晗武、郑炜。1 SN/T3423-2012黄瓜黑色根腐病菌检疫鉴定方法1 范围本标准规定了黄瓜黑色根腐病菌（PhomopsissclerotioidesvanKesteren）的检疫鉴定方法。本标准适用于黄瓜黑色根腐病菌寄主植物的植株、种子上黄瓜黑色根腐病菌的检疫鉴定。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样3术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3. 1假子座pseudostroma由菌组织和寄主植物组织结合而形成的子座。3.2假菌核pseudosclerotium由菌组织和寄主组织结合在一起形成的菌核。4黄瓜黑色根腐病菌基本信息学名: Phomopsis sclerotioides van Kesteren异名:Phomopsis sclerotioides Kest. spec. nov.中文名称：黄瓜黑色根腐病菌英文名：CucumberBlackRootRot分类地位：黄瓜黑色根腐病菌属真菌界（Fungi）、半知菌亚门（Deuteromycotina）、腔孢纲（Coelomycetes）、球壳孢目（Sphaeropsidales）、球壳孢科（Sphaeropsidaceae）、拟茎点霉属（Phomopsis）。传播途径：该病菌是一种土传病害，通过空气、水或土壤/介质传播。在不利情况下，病菌形成的菌核可以在土壤中存活多年。黄瓜黑色根腐病菌的其他信息参见附录A。5方法原理根据黄瓜黑色根腐病菌在寄主植物上的症状、病原菌的形态特征、生物学特性和PCR特异性反应对病菌进行鉴定（参见附录B、附录C）。1 SN/T3423--20126仪器设备和试验用具显微镜、解剖镜、超净工作台、培养箱、冰箱、高压灭菌器、离心机、PCR仪、电泳仪、凝胶成像仪、恒温光照培养箱、微量可调加样器（10ul、100μL、200μL、1000uL）、载玻片、盖玻片、滴管、培养Ⅲ、锻子、解剖刀、酒精灯、医用手术剪等。7试剂和培养基7.1试剂无菌双蒸水、液氮、蛋白酶K盐酸、氢氧化钠、醋酸铵、氯化钠、TBE缓冲液、无水乙醇、溴化乙锭三氯甲烷、异丙醇、异戊醇、TE缓冲液（pH8.0）、PCR试剂（包括TadDNA聚合酶、dNTP、缓冲液）、次氯酸钠、葡萄糖、五氯硝基苯(PCNB）、硫酸链霉素20%乳酸、除另有规定外，所有试剂均为分析纯，所有试验用水均为无菌双蒸水。7.2培养基A马铃薯葡萄糖琼脂培养基（HDA)和PCNB酸性马铃葡萄糖选择性培养基，配制方法见附录D。8现场检疫在光线充足的场所，借助放大镜重点检查植株的根部，根部的症状是产生灰黑色病斑，病斑边缘有明显的黑色线或带。抽取可疑的株或种子送实验室做进·步检验取样方法和步骤参照SN/T/212毫。9实验室检疫9.1取样挑取植株萎，根部变色的可疑植株，镜检。种子类样品，选取干癌、皱缩、变等非正常的种子，同时挑取夹带的植株残体，进行病原菌的分离和培养。9.2镜检将植物的根在自来水下洗干净，清洗时要注意不要把细根弄断。根部有变黑症状的样品，在解剖镜下观察延着根纵轴方向上是否有浅灰色或棕黑色假子座（参见图B.1），在根的皮层细胞中是否有假菌核（参见图B.2)。没有明显症状的根冲洗干净后，装人塑料袋内，在室温下保湿培养3d～7d后观察。9.3病原菌的分离和培养选择较新鲜的发病组织，切取