DB34T 3127-2018瓜蒌根结线虫病的病原检测和防治技术规程.docxVIP

ICS 65.020 B 16 安 徽 省 地 DB34 方 标 准 DB 34/T 3127—2018 瓜蒌根结线虫病的病原检测和防治 技术规程 Technical regulation for pathogen detection and disease control of Root-knot nematode disease on Trichosanthes kirilowii 文稿版次选择 2018 - 04 - 16 发布 2018 - 05 - 16 实施 安徽省质量技术监督局 发 布 I DB34/T 3127—2018 前 言 本标准按照 GB/T 1.1-2009 给出的规则起草。 本标准由潜山县植物检疫保护站提出。 本标准由安徽省农业标准化技术委员会归口。 本标准起草单位：潜山县植物检疫保护站、安徽农业大学植物保护学院。 本标准主要起草人： 吴彩玲、吴慧平、徐劲峰、鞠玉亮、黄为民、吴彩萍、李武伦、朱松涛、吴智。 1 DB34/T 3127—2018 瓜蒌根结线虫病的病原检测和防治技术规程 1 范围 本标准规定了瓜蒌根结线虫病的症状识别、病原物鉴定、防治原则和防治措施等方面的内容。 本标准适用于安徽省瓜蒌根结线虫病的病原检测和防治技术。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件， 仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T 8321(所有部分) 农药合理使用准则 NY/T 496 肥料合理使用准则 通则 NY/T 1276 农药安全使用规范总则 DB34/T 882 食用栝楼栽培技术规程 3 症状识别 3.1 在瓜蒌田间查找生长缓慢、矮化、黄化的瓜蒌植株，拔起植株观察根系，如根系上出现根结、须 根团， 可初步判断为根结线虫病危害， 区别于缺水缺肥症状。撕开根结处表皮， 如发现针尖大小白色小 点，即为根结线虫雌虫，区别于根肿病、根癌病。 3.2 根部症状可参照附录 A 进行判断。 4 病原物鉴定 4.1 形态学鉴定 根结线虫的形态学鉴定基于二龄幼虫和雌虫的形态及其测计值，具体流程如下： ——用挑针剥离瓜蒌根结上的卵块， 25℃处理 24 h 孵化二龄幼虫， 此外， 用挑针剥离根结处雌虫。 ——在显微镜下观察二龄幼虫和雌虫形态， 并对其主要形态进行测计， 测计值需遵循 De Man 公式。 根结线虫二龄幼虫和雌虫的形态描述参照附录B， 测计值参照附录C， 根据形态及其测计值即可判断 是否为根结线虫。 4.2 分子生物学鉴定 根结线虫分子生物学鉴定基于单条二龄幼虫或雌虫，具体流程如下： ——用挑针剥离瓜蒌根结上的卵块，25℃处理 24 h 孵化二龄幼虫，或用挑针剥离根结处雌虫。 ——将单条二龄幼虫置于含 8 μL ddH2O 和 1 μL 10×Ex TaqBuffer(Mg2+ free)的 200 μL PCR 管中；液氮中处理 1 min，95℃处理 2 min，重复三次；向 PCR 管中加入 1 μL 1 mg/mL 蛋 白酶 K， 65℃温育 1 h 后，95℃处理 10 min。 所得单条线虫 DNA 用于下游的 PCR 检测试验。 2 DB34/T 3127—2018 以 单 条 根 结 线 虫 DNA 为 模 板 ， 用 南 方 根 结 线 虫 特 异 性 SCAR 标 记 检 测 引 物 (Mi-F ： GTGAGGATTCAGCTCCCCAG ，Mi-R：ACGAGGAACATACTTCTCCGTCC)进行 PCR 检 测。 PCR 扩增程序：94℃ 4 min；94℃ 30 s，58℃ 30 s；72℃ 1 min，35 个循环；72℃ 10 min。 PCR 产物经 1.5％琼脂糖凝胶电泳检测， 根据 PCR 产物片段大小进行判断， 若扩增片段为 955 bp， 则为南方根结线虫。 扩增片段大小参见附录E。 5 防治原则 5.1 按照“预防为主，综合防治”的方针，以农业防治和健身栽培为基础，采取农业防治、物理防治、 生物防治与化学防治相结合的防治策略。 5.2 减少化学农药使用，并按照 GB/T 8321 和 NY/T 1276 的规定执行。 6 防治措施 6.1 农业防治 6.1.1 无病种苗培育 6.1.1.1 选择不携带根结线虫的种子和块根做繁殖材料。 6.1.1.2 选择土层深厚、土质疏松、肥力充足、排灌方便，未发生过根结线虫病害的田块培育幼苗。 6.1.2 新栽田块的防治方法 6.1.2.1 选择土层深厚、土质疏松、肥力充足、排灌方便、未发生过根结线虫病害的田块进行种植。 6.1.2.2 使用无病