SN 1132-2002松材线虫检疫鉴定方法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1132—2002松材线虫检疫鉴定方法Methods for quarantine and identification ofBursaphelenchus xylophilus(steiner . buhrer) nickle2002 ~ 08- 02 发布2003-01-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出人境捡验检疫行业标准松材线虫检疫鉴定方法SN/T 1132—2002*中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045电话：6852394668517548中国标推出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本 880×1230 1/16　印张 1字数21千字2002年11月第一次印刷2002年11月第一版印数 1-2 000*书号：155066·2-14754定价10.00元网址 版权专有侵权必究举报电话：（010SN/T 1132---2002言前本标准的附录A、附录B为规范性附录，附录C、附录D均为资料性附录本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局。本标准主要起草人：沈培垠、徐培方、周弘、刁彩华。本标准系首次发布的出入境检验检疫行业标准。 SN /T 1132--2002松材线虫检疫鉴定方法1范围本标准规范了松材线虫检疫鉴定方法和依据。本标准适用于口岸植物检疫过程中鉴定松材线虫。2 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。2. 1松材线虫 pine wood nematode,PWN一种线形动物，隶属于动物界、线虫门（Nematoda）、侧尾腺纲（Secernentea）、垫刃目（Tylenchida）、滑刃科（Apelenchoidoidea）、伞滑刃属（Bursaphelenchus）。能引起松树萎病，是针叶树木上最重要的病原生物之2. 2分散型3龄幼虫dispersal larva 3,Li松材线虫为扩散和度过不良生存环境，在寄主组织中出现的一种特定类型的3龄幼虫。2. 3持久型 4龄幼虫dauerlarva 4,L松材线虫为扩散传播，适应不良环境，在媒介天牛和寄主组织中出现的一种特定类型的4龄幼虫。2. 4繁殖型 3.4 龄幼虫 propagative larva 3 and propagative larva 4,L3,L4松材线虫正常生长和繁殖期出现的幼虫虫态。2. 5雕虫早期young female4龄幼虫刚完成蜕皮阶段而出现的早期松材线虫雌虫，具体表现为生殖系统发育尚未完全。3 检疫原理松材线虫分布在被感染寄主的树体组织中，利用其在水中的活动性和密度大于水的特性，可以将寄主组织破碎后浸泡在水中，使松材线虫从寄主组织中游离到水中，从而分离和获得松材线虫。利用甘油置换松材线虫体内的水，可以使松材线虫标本能保存较长时间，从而方便对标本进一步鉴定。依据松材线虫成虫头部、食道的形态特征、雌虫的阴门、尾端和雄虫交合刺、交合伞形状等稳定遗传的形态特征以及体长、体长/体宽比值等测计值，鉴定松材线虫。4仪器及用具4.1本工锯或电锯木工钻；4.2样品袋；4.3贝尔曼漏斗； SN/T 1132—20024.4浅盘（筛盘、底盘）；4.5改进型斗分离器；4.6标准套筛（40目、400目、500自）；4.7显微镜（放大倍率40×～1000×，具目镜测微尺、绘图仪等）；4.8体视显微镜（放大倍率10×～80×，具透射光源);4.9超净工作台；4.10恒温培养箱；4.111恒温烘箱；4.12钟面皿($7 cm,$9cm);4.13培养皿(7 cm,99 cm);4.14酒精灯；4.15盖玻片;4.16载玻片；4.17线虫挑针；4.18控温电热平板。5药品和材料5.1 指甲油5.20.1%硫酸链霉素(配方见附录A中A.6);5.3TAF双倍液（配方见附录A中A.1);·5.4棉蓝-乳酚油（配方见附录A中A.2);5.5福尔马林甘油液（配方见附录A中A.3);5.6封片蜡（配方见附录A中A.4)；5.7PDA培养基（配方见附录A中A.5);5.8灰葡萄孢菌(Botrytis cinerea)。6现场检疫6.1 直观检验对应施检疫物观察材质是否干燥，木质部有否蓝变，有无媒介昆虫栖居的痕迹，如侵入孔、蛀道、蛹室等。6.2抽样和取样6.2.1选取材质干燥无松脂香味、有蓝变、有媒介昆虫栖居痕迹的松木或其加工制品，若无上述特征时可随机抽样。抽样数量为每批总件数的0.5%～5%，最低不得少于三件，不满三件时全部抽取。6.2.2将所抽的样木锯成5cm左右的木段，或用木工钻多点钻取木屑（不得少于10g/份），标号后即送样至实验室检验。6.2.3取样时注意选取靠近虫道、蛹室的部位，钻取木屑时要注意