SN_T 1961.17-2013出口食品过敏原成分检测 第17部分：实时荧光PCR方法检测羽扇豆成分.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1961.172013出口食品过敏原成分检测第17部分：实时荧光PCR方法检测羽扇豆成分Detection of allergen components in food for export-Part 17 :Real time PCR method for detecting lupin components2013-09-16实施2013-03-01发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局a具你 SN/T 1961.17—2013前言SN/T1961《出口食品过敏原成分检测》共分为19部分：第1部分：酶联免疫法检测花生成分；第2部分：实时荧光PCR法检测花生成分；第3部分：酶联免疫吸附法检测荞麦蛋白成分；-第4部分：实时荧光PCR方法检测腰果成分；第5部分：实时荧光PCR方法检测开心果成分；第6部分：实时荧光PCR方法检测胡桃成分；第7部分：实时荧光PCR方法检测胡萝卜成分；第8部分：实时荧光PCR方法检测榛果成分；-第9部分：实时荧光PCR方法检测查仁成分；第10部分：实时荧光PCR方法检测虾/蟹成分；一第11部分：实时荧光PCR方法检测麸质成分；—第12部分：实时荧光PCR方法检测芝麻成分；第13部分：实时荧光PCR方法检测小麦成分；第14部分：实时荧光PCR方法检测鱼成分；第15部分：实时荧光PCR方法检测芹菜成分；第16部分：实时荧光PCR方法检测芥末成分；第17部分：实时荧光PCR方法检测羽扇豆成分；-第18部分：实时荧光PCR方法检测荞麦成分；第19部分：实时荧光PCR方法检测大豆成分。本部分为SN/T1961的第17部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国江苏出人境检验检疫局。本部分主要起草人：陈颖、张舒亚、祝长青、李妮、张佳谊、吕蓉、李想、徐宝梁。 SN/T 1961.17-2013出口食品过敏原成分检测第 17部分：实时荧光PCR方法检测羽扇豆成分1 范围SN/T1961.17的本部分规定十食品过敏原羽扇豆成分的实时荧光PCR检测方法。本部分适用于食品及其原料中过敏原羽扇豆成分的定性检测。本部分所规定方法的最低检出限（LOD)为0.01%（质量分数）。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版木(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测3术语和定义下列术语和定义适用于本文件3.1过敏原‧allergen又称致敏原或变应原，是指能够引起变态皮应的抗原。3.2过敏原羽扇豆成分cashew allergen ingredient本文件中过敏原羽扇豆成分即指羽扇豆特异性DNA片段3.3实时荧光 PCRreal time PCR在 PCR反应体系中加人荧光基团,利用荧光信号的积累实时监控整个 PCR扩增过程。3.4Ct 值 cycle threshold每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循环数。4　方法提要样品经研磨后，提取DNA，以DNA为模板，采用羽扇16SrRNA和18SrRNA内部转录间隔区核苷酸特异片段特异性检测引物和探针进行实时荧光PCR扩增，观察实时荧光PCR的增幅现象，判断样品中是否存在过敏原羽扇豆成分。1 SN/T 1961.17—20135试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB6682的要求。所有试剂均用无 DNA 酶污染的容器分装。5.1检测用引物(对)序列和探针羽扇豆成分扩增引物和探针、内参照（真核生物成分)引物和探针详见表1。表 1试验用引物和探针名称序列(5′-3)目的基因TCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTA内参照5端引物AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTT内参照3端引物真核生物18SrRNA基因FAM-CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAATCGAAC内参照探针C-TAMRA羽扇豆5端引物CCTCACAAGCAGTGCGA18S-26S核糖体内转录间羽扇豆3端引物TTGTTATTAGGCCAGGAGGA隔区(ITS)羽扇豆探针FAM-CCCCTCGTGTCAGGAGGCGC-TAMRA5.2 CTAB缓冲液:55 mmol/L CTAB,1 400 mmol/I NaCl,20 mmol/I EDTA,100 mmol/I. Tris,用10%盐酸调pH至8.0,121℃，高压灭菌20min，备用。5.3 TE缓冲液