NYT 1666-2008肉制品中苯并（α）芘的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 67.120.10B 45NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1666--2008肉制品中苯并[al芪的测定高效液相色谱法Determination of benzo [a] pyrene in meat productsHigh performance liguid chromatography method2008-07-15 发布2008-08-10实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 1666—2008前言本标准的附录 A 为资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部畜牧业司提出。本标准由全国畜牧业标准化技术委员会归口。本标准起草单位：农业部肉及肉制品质量监督检验测试中心。本标准主要起草人：戴廷灿、李伟红、卢普滨、周瑶敏、罗林广、王冬根、严寒I NY/T 1666—2008肉制品中苯并厂a花的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了熟肉制品中苯并[a]芪的高效液相色谱检测方法。本标准适用于烧烤、油炸、烟熏等肉制品中苯并[a芘的检测。本方法的检出限为0.5μg/kg。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T6682分析实验室用水规则和试验方法3原理试样加环已烷匀浆、超声提取，用二甲基亚砜反萃取。在二甲基亚砜相中加人水溶液，用环已烷反萃取，浓缩近干，用甲醇溶解，供高效液相色谱测定(荧光检测器）。外标法定量。4 试剂除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂;实验用水应符合GB/T6682中一级水规定。4.1无水硫酸钠于450℃焙烧4h后备用。4.2环已烷：色谱纯4.3二甲基亚砜:色谱纯4.4甲醇:色谱纯4.5乙腈色谱纯4.6硫酸钠溶液:2.0g/L称取0.20g无水硫酸钠（4.1），溶于100mL水中。4.7 苯并[a]芘标准储备液准确称取苯并[a］芘（又名3,4-苯并芘，标准品，含量≥99%)0.0150g于1000mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度。该储备液浓度为 15μg/mL。置 4℃冰箱中保存。4.8苯并[a]芘标准工作液准确量取1mL标准储备液（4.7），用甲醇稀释至 10 mL，从中准确量取 1mL，置于 10 mL容量瓶中,用甲醇稀释成 150 ng/mL浓度的苯并[a]芘标准工作液。5仪器和设备5.1高效液相色谱仪：附荧光检测器5.2分析天平:感量 0.000 1g1 NY/T 1666--20085.3天平：感量 0.01g5.4组织匀浆机：转速不低于10000 r/min5.5超声波提取器5.6离心机：转速不低于3500r/min5.7旋涡混合器5.8旋转蒸发器5.9氮气吹干装置5.10 离心管:50 mL5.11茄形瓶:50 mL5. 12滤膜：有机相，0.45μm6　试样制备6.1样品制备取适量代表性样品，绞碎均匀6.2样品的保存应常温或冷藏下保质的产品于4℃保存，应冷冻保质的产品在一18℃以下保存。7 测定步骤7.1 提取准确称取试样(6)5.00g于50mL离心管(5.10)中，加人5.0g无水硫酸钠（4.1)，加人15mL不己烷（4.2），匀浆处理2min，超声提取5min，离心2min，收集上清液于50mL茄形瓶（5.11)中，残渣分别用10mL环已烷重提2次，合并环已烷提取液，用旋转蒸发器浓缩到1mL左右，转移浓缩液到另一个50mL的离心管中，用环已烷清洗茄形瓶，合并环己烷液，保持体积5mL左右，分别加人5mL二甲基砜萃取2次，每次旋涡混合2min，离心2min，用吸管吸出二甲基亚碳，合并2次二甲基亚叉萃取液于50 mL离心管中,待净化处理。7.2净化在二甲基亚砜萃取液(7.1)中,加人 15mL2.0 g/L硫酸钠溶液（4.6),分别如人 5mL环己烷反萃取3次，每次旋涡混合2min，离心2min。吸出环已烷，合并环已烷于20mlL刻度试管中，用氢气吹干装置（5.9)吹至近干，用甲醇溶解，定容到1.0mL，过0.45um滤膜（5.12)，供高效液相色谱检1分析。7.3 测定7.3.1仪器条件色谱柱:Cls柱,5μm，4.6mmX250 mm。流动相：乙腈十水（88十12），用前过滤膜，脱气。流速:1.2 mL/min。荧光检测器：激发波长384nm；发射波长406nm。柱温：30℃。进样量：10 μL。7.3.2标准曲线的绘制待仪器基线稳定后,分别吸取0.00mL、0.20mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80 mL、1.00 mL标准工作液,用甲醇定容至1mL(其浓度分别为0ng/mL、30ng/mL、60 ng/mL、90n