NY_T 2962-2016奶牛乳房炎乳汁中金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、无乳链球菌分离鉴定方法.pdf

ICS 11.220B 41NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2962—2016奶牛乳房炎乳汁中金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、无乳链球菌分离鉴定方法Methods for isolation and identification of Staphylococcusaureus ,coagulase-negative Staphylococcus and Streptococcusagalactiae in milk from dairy cow with mastitis2016-10-26 发布2017-04-01实施中华人民共和国农业部、发布 NY/T 2962—2016前言本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草+本标准由中华人民共和国农业部提出。本标准由全国动物卫生标准化技术委员会（SAC/TC181)归口。本标准起草单位：中国农业科学院兰州畜牧与兽药研究所，本标准主要起草人：王旭荣、李宏胜、李建喜、杨峰、王学智、张世栋、李新圃、杨志强、王磊、罗金印I NY/T2962—2016奶牛乳房炎乳汁中金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、无乳链球菌分离鉴定方法1范围本标准规定了奶牛乳房炎乳汁中病原性金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌、无乳链球菌的分离和鉴定方法。本标准适用于奶牛乳房炎（临床型乳房炎和隐性乳房炎）的病原菌诊断，所分离的病原菌可进一步开展药物敏感性检测，为奶牛乳房炎的治疗措施提供依据。2规范性引用文件下列义件对于本义件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本义件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB19489实验室生物安全通用要求3术语和定义下列术语和定义适用于本义件。3. 1金黄色葡萄球菌Staphylococcusaureus种血浆凝固酶试验为阳性、革兰氏染色为阳性的葡萄球菌，是引起奶牛乳房炎的主要病原菌之一。3. 2凝固酶阴性葡萄球菌coagulasenegativeStaphylococcus，CNs一类血浆凝固酶试验为阴性、革兰氏染色为阳性的葡萄球菌，是皮肤和黏膜的常居菌，常见的CNS主要包括表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、腐生葡萄球菌、路邓葡萄球菌、松鼠葡萄球菌、产色葡萄球菌、鸡葡萄球菌、沃氏葡萄球菌等20多种。3. 3无乳链球菌Streptococusagalactiae-种CAMP试验为阳性、革兰染色为阳性的B群链球菌，是引起奶牛乳房炎的主要病原菌之一。3. 4CAMP试验CAMPtestCAMP是Christie.Atkins.Munch-Peterson等人名的缩写.因本试验是他们三人所创建。CAMP试验的原理是原来不溶血或溶血不明显的无乳链球菌.在有金黄色葡萄球菌产物存在时.呈明显的β型溶血，可区分无乳链球菌、停乳链球菌和乳房链球菌。在本标准中，用于无乳链球菌的鉴定，3. 5nuc 基因 thermonuclease gene耐热核酸酶是金黄色葡萄球菌的一种毒力因子，100℃作用15min不失去活性，一般由致病菌产生。nuc基因是编码耐热核酸酶的基因序列.在本标准中.1uc基因用于金黄色葡萄球菌的PCR鉴定。 NY/T2962—20163. 6sip基因surfaceimmunogenicproteingenesip蛋白是无乳链球菌的一种表面免疫相关蛋白，是暴露在菌体表面的一种具有黏附和定植作用的因子。sip基因是编码sip蛋白的基因序列，基因序列保守。在本标准中，sip基因用于无乳链球菌的PCR鉴定。4采样前检查4.1总则在采集乳样前，首先对乳房外观和乳汁性状进行观察。4.2临床型乳房炎的检查临床型乳房炎的检查至少包括以下5个方面：乳房的大小、颜色、对称性和硬度；a）b）乳房是否有发红、肿胀和发热；触摸时奶牛是否有疼痛反应及有无外伤或瘘管；c）乳汁的气味和颜色；d）乳汁有无絮片、凝块；e）奶产量的变化4.3临床型乳房炎的判定奶牛乳区出现红、肿、热、痛或乳汁性状改变（乳汁颜色改变，或乳汁呈水样或有絮状或有乳凝块或血乳）等症状.则可判定为临床型乳房炎4.4隐性乳房炎的检查与判定隐性乳房炎可参照NY/T2692的规定进行检验判定，也可用商品化的隐性乳房炎诊断试剂进行检验判定。5奶牛乳房炎病牛乳样的采集5.1试剂与材料乳样采集管：配制方法见A.1；生物冰袋或冰块。5.2操作方法先用温水清洗乳房.然后依次用0.2%新洁尔灭浸泡的脱脂棉或纱布、75%酒精棉擦拭消毒乳头。每个乳头弃去初始2把～3把奶.然后按无菌操作规程分别采集每个乳室的乳样约5ml。采集的乳样保存于乳样采集管中.立即检验。如需运输送检，在运输过程中加入生物冰袋或冰块使乳样温度保持在2℃～8℃.并保证在10d以内送到相关实