SN_T 3729.1-2013出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法 第1部分：草莓成分检测 PCR法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 3729.1—2013出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法第1部分：草莓成分检测PCR 法Identification of fruit species in export food and drink-Part 1 : Detection of Fragaria ananassa ingredient--PCR method2014-06-01 实施2013-11-06 发布中华人民共和国0发布国家质量监督检验检疫总局房直优纠涂 SN/T 3729.1--2013前言SN/T3729《出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法》共分为以下10个部分：第1部分：草莓成分检测PCR法；-第2部分：杏成分检测实时荧光PCR法；第3部分：梨成分检测实时荧光 PCR法；-第4部分：芒果成分检测　实时荧光PCR法；一第5部分：木瓜成分检测实时荧光PCR法；一第6部分：苹果成分检测实时荧光PCR法；PCR法;—第 7部分:葡萄成分检测第 8部分：山楂成分检测实时荧光PCR法；第9部分：桃成分检测实时荧光PCR法；第10部分：香蕉成分检测实时荧光PCR法。本部分为SN/T3729的第1部分。本部分按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国上海出人境检验检疫局、中华人民共和国山东出人境检验检疫局。本部分主要起草人：吴亚君、陈颖、韩建勋、黄文胜、王斌、李想、高宏伟、邓婷婷1 SN/T 3729.1—2013出口食品及饮料中常见水果品种的鉴定方法第1部分：草莓成分检测PCR 法1范围SN/T3729的本部分规定了出口食品和饮料中草莓成分的实时荧光PCR检测方法。本部分适用于果汁、果酱及其他以水果为原辅料的食品中草莓成分的定性检测。本部分所规定方法的最低检出限（LOD)为1%（质量分数）2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测3术语和定义下列术语和定义适用于本文3.1草莓 Fragaria ananassa蔷薇科草莓属植物的通称|属多年生草本植物。3.2清汁 clarified juice经过澄清工艺加工，没有浑浊和沉淀的果江3.3浊汁 cloudy juice未经过澄清工艺加工，浑浊但未分层和沉淀的果汁。4缩略语下列缩略语适用于本文件。DNA：脱氧核糖核酸(deoxyribonuleic acid)dNTP:脱氧核苷酸三磷酸(deoxyribonuleoside triphosphate)dATP:脱氧腺苷三磷酸(deoxyadenosine triphosphate)dCTP:脱氧胞苷三磷酸(deoxycytidine triphosphate)dGTP:脱氧鸟苷三磷酸(deoxyguanosine triphosphate)dTTP:脱氧胸苷三磷酸(deoxythymidine triphosphate) SN/T 3729.1-2013dUTP:脱氧尿苷三磷酸(deoxyuridine triphosphate)CTAB：十六烷基三甲基溴化铵（cetyltrithylammonium bromide)Tris:三羟甲基氨基甲烷（tris（hydroxymethyl）aminomethane)EDTA:乙二胺四乙酸(ethylene diaminetetraacetic acid)Taq :水生栖热菌(Thermus aquaticus)OD:光度密度(optical density)5方法提要提取DNA，以DNA为模版，分别采用草莓的特异性检测引物进行PCR扩增，观察PCR的扩增现象，进行食品及饮料中草莓成分的检测鉴定，其中以草莓果肉DNA为阳性对照，以非草莓来源的DNA为阴性对照，无菌水作为空白对照。6试剂和材料除另有规定外，所有试剂均为分析纯或生化试剂。实验用水符合GB/T6682的要求。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。6.1检测用引物和探针；见表1。表 1引物探针序列引物/探针引物/探针序列（5→3）靶基因扩增片段长度内参照5端引物 CTTGATTTTACCAAAGATGATGA植物核酮糖-1.5-二磷酸159 bp羧化酶/加氧酶基因内参照3端引物TTCTTCGCATGTACCCGCAG草5端引物TGTCAAACCTCGGTGCCTTGTC草葬核糖体126 bpITS1-5. 8S-ITS2 基因草每3端引物TGCTTAAATTCAGCGGGTAAC6.2