病毒与细胞的相互作用演示文稿.pptVIP

胞浆内有空泡形成，如：猴病毒SV40、呼肠孤病毒等。 当前第31页\共有51页\编于星期三\7点 (1)病毒对宿主细胞膜的影响 一些具有有融合活性的表面蛋白的有囊膜病毒能够启动细胞之间的融合，形成多核细胞如合胞体病毒。 当前第32页\共有51页\编于星期三\7点 合胞体（syncytia）：是病毒感染后导致感染细胞及相邻细胞细胞膜融合的产物，表现为若干细胞的相邻细胞膜消失，成为多核巨细胞。 当前第33页\共有51页\编于星期三\7点 (2)病毒对细胞骨架的影响 许多病毒的感染会导致细胞骨架纤维系统（细胞骨架由维丝、中介丝及维管组成）的瓦解 。由于细胞骨架在维持细胞形态中起一定作用，所以病毒引起细胞骨架的改变是受染细胞结构变化的原因之一。 当前第34页\共有51页\编于星期三\7点 病毒引致的细胞凋亡和坏死 细胞的死亡则是因病毒感染引起了细胞的生理性死亡所致，亦即程序性死亡，或称为凋亡(apoptosis)。 凋亡与坏死的细胞有不同的形态变化，凋亡细胞的染色质浓缩、边缘化。内源性核酸内切酶被激活，将细胞DNA降解成180-200dp的片段，可在琼脂糖凝胶电泳时出现特征性的电泳带，称之为“梯带”。坏死的细胞没有内切酶激活所致的变化。 凋亡是宿主细胞的重要防御机制，细胞坏死总是在病毒复制完成之后发生。 当前第35页\共有51页\编于星期三\7点 病毒引起的细胞调亡 当前第36页\共有51页\编于星期三\7点 空斑试验 将适当浓度的病毒悬液加入单层细胞培养中，当病毒吸附细胞后，再覆盖一层融化的琼脂。病毒在细胞内复制后产生局限性病灶，病灶逐渐扩大，肉眼也能看见，此即空斑试验。 当前第37页\共有51页\编于星期三\7点 当前第38页\共有51页\编于星期三\7点 CELLS 空斑是由一个感染性病毒粒子复制形成的，类似于细菌的菌落，称为空斑形成单位(Plaque-forming unit，PFU)。病毒悬液中的感染性病毒量以每毫升含有的PFU来表示。 当前第39页\共有51页\编于星期三\7点 当前第40页\共有51页\编于星期三\7点 当前第41页\共有51页\编于星期三\7点 病毒与细胞的相互作用演示文稿 当前第1页\共有51页\编于星期三\7点 优选病毒与细胞的相互作用 当前第2页\共有51页\编于星期三\7点 目的要求： 1、掌握病毒的细胞培养的特点和 方法 以及病毒与细胞的相互作用机制。 2、了解病毒持续性感染的机制和干扰素的产生和作用机理 。 ?重点：病毒的细胞培养的特点、方法和病毒与细胞的相互作用机理 ?难点：病毒与细胞的相互作用机理和病毒持续性感染的机制和干扰素的产生和作用机理 当前第3页\共有51页\编于星期三\7点 第一节 病毒的细胞培养 病毒是严格的细胞内寄生微生物，培养病毒必须使用细胞。根据病毒的不同选用敏感动物（动物接种）、鸡胚（鸡胚接种）或离体细胞进行分离培养（细胞培养）。 当前第4页\共有51页\编于星期三\7点 一、动物接种 接种后通常以动物发病、死亡作为感染的指标。 按病毒侵袭部位不同选择适当的接种途径。嗜神经病毒接种在小鼠的脑内。痘苗病毒和单纯疱疹病毒接种于家兔角膜。 当前第5页\共有51页\编于星期三\7点 动物接种的优缺点： 优点：⑴不需要复杂的仪器设备； ⑵技术简单； ⑶易成功 缺点：⑴个体差异大 ⑵价格昂贵 ⑶数量有限 ⑷需要隔离畜舍 当前第6页\共有51页\编于星期三\7点 二、鸡胚接种 一种比较经济简便的方法。 当前第7页\共有51页\编于星期三\7点 当前第8页\共有51页\编于星期三\7点 鸡胚接种的优缺点： 优点：技术简单、来源充沛、价格低廉、数量可大，不需特殊设备 缺点：很多病毒不能适应，主要是哺乳动物的病毒。 当前第9页\共有51页\编于星期三\7点 三、细胞培养 细胞培养(cell culture)是指利用机械、酶或化学方法使动物组织或传代细胞分散成单个乃至2～4个细胞团悬液进行培养。 当前第10页\共有51页\编于星期三\7点 (一)细胞培养的优点： 每个细胞生理特性基本一致，对病毒易感性相等 无个体差异，准确性和重复性好 严格执行无菌操作 细胞培养本身就能显示病毒的生长特征 应用空斑技术可进行病毒的克隆化 当前第11页\共有51页\编于星期三\7点 （二）细胞的类型 根据细胞来源、染色体特征及传代次数，可分为三种类型： 1.原代细胞(primary cell)：动物组织经胰蛋白酶消化处理，使细胞分散而获得的单个细胞，再生长于培养器皿中。大多数组织均可制备原代细胞，但生长的快慢及