各类化学成分的提取、分离与检识技术—蛋白质和酶（中药化学课件）.pptx

;概 述;一、理化性质; 4. 变性：在高温、高压、紫外线或与强酸、强碱、有机溶剂、重金属盐等作用时易变性而丧失活性。此类性质不可逆。 5. 盐析：在蛋白质和酶的水溶液中加入大量电解质如硫酸铵、氯化钠等，可使之沉淀。 6.水解和酶解：蛋白质在酸、 碱、酶作用下可逐步水解，最终产物为α-氨基酸。酶具催化性和专属性。植物中所有的苷往往与特定的酶共存，在多数情况下，需防止酶水解中药中欲提取的成分，可用加热或高浓度的乙醇、强酸、强碱等处理使其失去活性。有时则要利用酶水解的专属性，有选择的水解某种苷键，如麦芽糖酶只能水解α-苷键，而对β-苷键无作用。;二、提取与分离;　１.分级沉淀法 （1）有机溶剂分级沉淀法：最常用的溶剂为乙醇和丙酮。溶剂和蛋白质溶液均需预先冷却，然后将有机溶剂由低到高选择几个浓度，每个浓度沉淀的蛋白质应立即离心分离，并溶于足够量的水或缓冲溶液中，使其所含有的有机溶液稀释，然后在母液中加入有机溶剂至预定的另一浓度，以沉淀另一部分蛋白质。 （2）无机盐分级沉淀法 （3）pH分级沉淀法 ; ; 离子交换色谱：除常用的各种离子交换树脂外，在分离蛋白质时还可以用亲水性较强的离子交换剂，例如离子交换纤维粉，和离子交换凝胶，当它们带有二乙胺乙基时表现出阳离子交换性能，若带有羧甲基时则表现出阴离子交换性能。在做此类色谱分离时，常采用分级洗脱或梯度洗脱技术。;三、检识技术;　（3）酚试剂反应：蛋白质分子中络氨酸的酚基在碱性条件下与酚试剂作用，生成蓝色物质。该反应灵敏度比双缩脲100倍，可用于蛋白质定性、定量。 　（4）茚三酮反应：与氨基酸反应相同。 　　2. 色谱检识技术　　　 吸附剂：硅胶G； 展开剂：三氯甲烷-甲醇（9:1）； 显色剂：2%茚三酮溶液。