NY_T 2550-2014饲料中黄曲霉毒素B1的测定 胶体金法.pdf

ICS 65.120B 25NY中华人民共和国农业行业标准NY/T料中黄曲霉毒素B的测定胶体金法Determination of aflatoxin B, in feed-Colloid gold method2014-03-24 发布2014-06-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 2550—2014前言本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位：中国农业科学院油料作物研究所、农业部油料及制品质量监督检验测试中心本标准主要起草人：李培武、姜俊、张奇、丁小霞、张文、张兆威、王督、唐晓倩。- NY/T2550—2014饲料中黄曲霉毒素B，的测定胶体金法1范围本标准规定了胶体金法测定饲料中黄曲霉毒素B的方法，本标准适用于饲料和饲料原料中黄曲霉毒素B测定。本标准黄曲霉毒素B检出限为1.0μg/kg。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理试样中黄曲霉毒素B，在层析过程中与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制了抗体和硝酸纤维素膜检测线上黄曲霉毒素B，-BSA偶联物的免疫反应，使检测线颜色变浅，通过检测颜色变化进行测定。4试剂除非另有规定，仅使用分析纯试剂。4.1水，按照GB/T6682中的要求，二级4.2蔗糖(CH2())。4.3牛血清白蛋白(BSA)，纯度大于98%。4.4吐温-20(CsH.)2)。4.5甲醇(CH.()H)。4.670%甲醇溶液：取70.0ml.甲醇（4.5).加水（4.1)30.0ml..混匀。4.7样品稀释液：取1.0g蔗糖（4.2）、0.5g牛血清白蛋白（4.3）和2.5g吐温-20（4.4）溶解于100.0mL水(4.1)中。4.81000ng/ml.黄曲霉毒素B标准溶液4. 99100ng/ml.黄曲霉毒素B，标准储备液：准确吸取黄曲霉毒素B标准溶液（4.8)1.0ml.于10ml容量瓶中，甲醇定容。4℃可保存3个月。警告：由于黄曲霉毒素毒性很强，试验人员应注意自我保护。操作时.应避免吸人、接触黄曲霉毒素标准溶液。标准溶液配置应在通风橱内进行.工作时应戴眼镜、穿工作服、戴医用乳胶手套。凡接触黄曲霉毒素的容器.需浸人10%次氯酸钠溶液12h以上。同时.为了降低接触黄曲霉毒素的机会，本标准鼓励直接购买并使用黄曲霉毒素的有证标准储备液。5仪器设备5.1光谱成像检测仪或胶体金免疫层析检测仪：图像分辨率优于2048×1532dpi。5.2分析天平：感量0.1g。5.3分样筛：20目。5.4均质机，转速大于等于20000r/min。1 NY/T 2550—20145.5漩涡混合器。5.6恒温装置：（37.0±2.0)℃。5.7微量移液器：1μl～10μl..10μl～100μl.100μL~1000μl.。5.8黄曲霉毒素B胶体金免疫层析装置（图1）：固定黄曲霉毒素B:-BSA偶联物，检测灵敏度不低于0.3ug/kg.用于样品中黄曲霉毒素及黄曲霉毒素B,-BSA偶联物与胶体金标记抗体反应的载体7(a)正视图(b)侧视图说明：/纸板；5-——样品垫；一吸水垫；26——质控线：检测垫；3-7——检测线。一金标垫；4图1黄曲霉毒素B，胶体金免疫层析装置5.8.1黄曲霉毒素B，-BSA偶联率为（1：5）～（1：20)（BSA：AFB）。5.8.2样品垫：玻璃纤维、聚酯纤维或纸质薄片。5.8.3硝酸纤维素膜：4cm毛细时间不小于135s。5.8.4金标垫：附着有5μl.胶体金标记的黄曲霉毒素B，抗体。5.8.5吸水纸。5.8.6底板。5.8.7连接胶带。5.9中速定性滤纸。5.10净化柱：3ml硅胶SPE柱。6分析步骤6.1试样制备样品粉碎至全部通过分样筛（5.3），充分混合。2 NY/T2550—20146.2前处理和空白基质溶液制备6.2.1前处理准确称取25.0g试样置于烧杯中，准确加人100ml，甲醇溶液（4.6），用均质机（5.4）在20000r/min条件下提取2min，静置1min，中速定性滤纸（5.9）过滤，收集滤液，取2.0ml.滤液过净化柱（5.10），收集净化液。用稀释液（4.7)稀释净化液至黄曲霉毒素B胶体金免疫层析装置（5.8）检测范围内，漩涡混合器（5.5）混匀，备用。6.2.2空白基质溶液制备：取阴性样品，按6.2.1制备空白基质溶液，备用。6.3取100μl稀释后的净化液（6.2.1)加人于黄曲霉毒素B胶体金免疫层析装置（5.8)内.恒温装置（5.6)中反应10min。6.4上机(5.1)检测。6.5标准曲线分别准确吸取黄曲霉毒