含ecolif因子的马立克氏病病毒1型mdv1转移载体的构建.docxVIP

含ecolif因子的马立克氏病病毒1型mdv1转移载体的构建 0 总结 马丽克病毒是膀胱病毒科i和膀胱病毒科的成员。 1 材料和方法 1.1 细胞和病毒 CEF原代和继代细胞按常规方法由9～10日龄SPF鸡胚（购自南京药械厂）制备。CVI988/Rispens株由本室保存。 1.2 质粒psk和宿主菌gs49 质粒phCMVgpt由本室构建保存，质粒pSK和宿主菌DH5α由本室保存，质粒pBlueloxP和宿主菌GS500由美国伊利诺伊大学荣立军博士惠赠。 1.3 主试剂 限制性内切酶PacⅠ和NheⅠ为NewEngland公司产品；其它限制性内切酶、T 1.4 taacctgtatactrt-pcrpse 根据LoxP位点的序列，设计互补的两条链，并分别在5′端加上SpeⅠ和SmaⅠ酶切位点，序列如下（粗体为lox P位点序列）：P1:5′CTAGTATAACTTCG TATAATGTATGCTATACGAAGTTATCCC3′和P2:5GGGATAACTTCGTATAGCATACATTATACGAAG TTATA3′。根据PstⅠ和NheⅠ酶切位点的序列，设计一条链，以合成PstⅠ-NheⅠ-PstⅠAdaptor，序列如下：5′GCTAGCTGCA3′。上述寡聚核苷酸由大连宝生物公司合成，合成双链的条件为：95℃5 min, 72℃20min, 66℃20 min, 37℃