NaCl胁迫对小麦抗盐突变体根液泡膜H_ATP酶和H_PP酶活性的影响.docVIP

NaCl胁迫对小麦抗盐突变体根液泡膜H_ATP酶和H_PP酶活性的影响 + + Na Cl 胁迫对小麦抗盐突变体根液泡膜 H2ATP 酶 和 H2 PP 酶活性的影响 郭房庆 黄 昊 汤章城 ( ) 中国科学院上海植物生理研究所 ,上海 200032 ( 摘 要 : 随 着 盐 胁 迫 强 度 NaCl 0 , 150 结果表明 ,盐胁迫下小麦抗盐突变体根液 + ) ( ) mmol/ L和时间 0 , 72 h的 增 加 , 小 麦 抗 泡膜微囊依赖于 ATP 和 PPi 的 H 转运活 + + 盐突变 体 根 液 泡 膜 H 2ATP 酶 和 H 2PP 酶 ( 力 显 著 高 于 野 生 型 郭 房 庆 和 汤 章 城 活性显著增加 ,虽然野生型酶活性在盐胁迫 ) 1999。本文就突变体和野生型盐胁迫下 下也有增加 ,但其增加的幅度显著低于突变 + + + + 液泡膜 H 2ATP 酶 和 H 2PP 酶活性变化 体 , H 2PP 酶活性的差异更为显著 。H 2ATP+ + 进行 了 比 较 研 究 , 并 综 合 分 析 了 H 2ATP 酶和 H 2PP 酶的最适 p H 值在两者之间以及 + + 盐胁 迫 前 后 均 无 改 变 , 分 别 为 7. 0 和 8. 0 。 酶和 H 2PP 酶活性与 H 转运活力增强之 无盐胁 迫 下 野 生 型 液 胞 膜 58 kD 蛋 白 带 缺间的关系 。 失 ,盐胁迫下这一蛋白有微弱的表达 。与此 不同 ,突变体 58 kD 蛋白在盐胁迫前后均有 1 材 料 与 方 法 明显的表达 ,但其 29 kD 蛋白带在无盐胁迫 下明显减弱 。 ( 1. 1 材料培养与盐胁迫处理 小麦 Triticum aes2 + ) () tivum抗盐突变体 植申 2 号,是本实验室通过 X关键 词 : 小 麦 , NaCl 胁 迫 , 液 泡 膜 , H 2ATP + 射线和辐射敏化剂复合诱变处理科城 5 号后经多 酶 , H 2PP 酶年的实验室和大田筛选获得的 。野生型为科城 5 学科分类号 : Q945μ号 。种子浸泡 24 h ,28 ?萌发 24 h ,置于 150 mol- 2 - 1 + m s 的光照下培养 ,光照时间 12 h ,温度 25 ?。 盐胁迫下植物细胞减少胞质内 Na 累 培养液为 1/ 10 的 Hoagland 溶液 。将生长 4 d 的幼 + + 积一 个 重 要 方 式 是 通 过 液 泡 膜 Na / H 苗培养于不同浓度 NaCl 溶液中进行盐胁迫处理 。+ + ) (antiporter Na / H 反向转运体把胞质中 () 1. 2 液泡膜的制备 参照 Wang 和 Sze 1985的 + 的 Na 排入液泡 ,这是一种胞内区隔化效 方法 , 略 加 改 动 。取 小 麦 幼 根 用 蒸 馏 水 冲 洗 干 + - ( ) ( 净 ,以 1?4 W/ V 加入匀浆缓冲液 Hepes2Tris 30 应 。Na 和 Cl 胞内区隔化对植物细胞的 ( ) mmol/ L p H 7. 5 , 甘露醇 250 mmol/ L ,0. 5 %W/ V 盐适应是十分必要的 ,不仅降低了胞质内 ( ) BSA , 10 % V / V 甘 油 , PMSF 1 mmol/ L , EGTA 5 + 的 Na 浓度 ,而且还可以使细胞能利用累 ) mmol/ L ,DTT 2 mmol/ L ,10 % PVPP,冰浴匀浆后 ,4 积在液泡中的大量离子进行渗透调节 。生 层纱布过滤 ,滤液以 480 ×g 离心 10 min ,上清液 长于高 NaCl 环境中的盐适应烟草 ,其液泡 以 6 000 ×g 离心 10 min ,取上清液于 60 000 ×g + - 中累积的 Na 和 Cl 明显高于胞外 , 而其 ( 离心 30 min ,沉淀置于悬浮缓冲液中 Hepes2Tris 6 mmol/ L p H7. 5 , 10 %甘 油 , 甘 露 醇 250 mmol/ L , (胞质中这两种离子的浓度较为正常 Binzel + + ) DTT 2 mmol/ L , PMSF 0. 1 mmol/ L。悬 浮 液 铺 于 ) 等 1988。液泡膜上 Na / H antiporter 运 6 % dextran T270 的离心管中 ,70 000 ×g 离心 2 h ,+ + 转是靠跨液泡膜的 H 梯度来驱动的 。H 收集 0 %与 6 %的界面部分 ,即为液泡膜制剂 。然 梯度的 形 成 依 赖 于 液 泡 膜 上 的 两 种 质 子 后立即进行酶活性的测定或于液氮中保存 。 + + 泵 : H 2ATP 酶 和 H 2P