NYT 1114-2006微生物肥料实验用培养基技术条件.pdf

ICS 65.080G 20NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 1114—2006微生物肥料实验用培养基技术条件Technical specifications for culture medium ofmicrobial fertilizer experiment2006-07-10 发布2006-10-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 1114—2006前 言本标准的附录 A为规范性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位：农业部微生物肥料质量监督检验测试中心。本标准主要起草人：关大伟、李俊、姜昕、李力、沈德龙、曹凤明、陈慧君。 NY/T 1114—2006微生物肥料实验用培养基技术条件1 范围本标准规定了微生物肥料实验室使用的培养基技术要求。本标准适用于微生物肥料产品质量检验、菌种培养与保藏用培养基的制备。2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 19524.1—2004肥料中粪大肠菌群的测定NY 527--2002　光合细菌菌剂3 术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1培养基medium由人工配制的适合微生物生长、代谢、繁殖和保存的营养基质。4培养基制备流程图合格|使用}液体培养基[称量[溶解]|调节 pH][分装][灭菌合格检验事不合格弃用固体培养基制备平板或斜面5.培养基选用原则5.1含有满足所培养的微生物生长必需的营养物质。5.2各种营养物质要有合适的比例和浓度。5.3 有合适的 pH 范围和一定的缓冲 pH 能力。5.4有一定的氧化还原电位和合适的渗透压。5.5对于特殊用途的培养基,除遵循以上原则外,还应满足以下要求：5.5.1在选择培养基中,应加人利于目的微生物生长而抑制其他微生物生长的化学物质。5.5.2菌种保藏培养基选用原则对于产芽孢或孢子的菌种保藏培养基应以易产生芽孢或孢子为原则。对于自养微生物的菌种保藏培养基应只使用无机盐类，不使用有机物。对能利用无机氮源的微生物,其菌种保藏培养基中不宜使用有机氮源。1 NY/T 1114--200对营养缺陷型微生物,其菌种保藏培养基中应含有该缺陷所需的物质。对耐某种药物的微生物,其菌种保藏培养基中应含有一定浓度的该种药物。6要求6.1材料6.1.1用于配制培养基的化学试剂纯度至少为化学纯。6.1.2试剂出现颜色改变、沉淀、混浊、吸潮结块的现象时，不宜使用。6.1.3天然原材料应质量稳定,未发生霉变、生虫和变质。6.1.4琼脂凝固后应具有良好的透明度。6.2器Ⅲ6.2.1配制试剂所用的器皿应洁净。6.2.2盛装培养基的器Ⅲ应由对微生物无毒害并耐高温的材料制成。6.2.3材料需加热溶解时，可选用玻璃容器、塘瓷缸和不锈钢容器等,禁用铜制、铝制和铁制容器。6.3棉塞或硅胶塞6.3.1不应使用脱脂棉制作棉塞。6.3.2使用棉塞或硅胶塞时,将其长度的2/3塞人容器内。要求松紧适当,紧贴管壁。6.3.3灭菌时，棉塞外要加包牛皮纸或耐高温透气塑料薄膜，以防止灭菌时棉塞受潮或进水。6.4培养基配制6.4.1材料称量根据培养基配方,准确称取相应材料的量。当配方中某种成分微量时，可预先将该成分配制成一定浓度的母液，然后按量加人。母液应低温保存。6.4.2材料溶解不溶于水的组分应在所需的溶剂中溶解后,再加人到培养基中。非溶性组分(如CaCO3),应最后加人。易形成沉淀的组分应分别溶解。不易溶解的组分应做预处理。加热溶解过程中一旦出现焦化现象时应弃用。培养基中含有指示剂或有颜色的试剂时,应在培养基 pH调节好之后再加人。6.4.3pH测定与调节用精密pH试纸或酸度计测定培养基的pH。培养基的pH用稀酸或稀碱溶液调节。调节过程中不可用酸碱溶液反复调节。6.4.4分装装人三角瓶的培养基体积不应超过其容量的1/2,装人试管的培养基体积为其容量的1/5～1/4。分装过程中防止培养基粘附在瓶口或管口。6.4.5灭菌高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌控制的条件为121℃、维持 30 min。当培养基中含有不耐高温的组分时,可采用115℃,维持 15 min～30 mino过滤除菌在无菌条件下,将待除菌溶液经滤膜为中≤0.2 μum的细菌过滤器,达到除菌的目的。适用于易受2 NY/T 1114--2006高温破坏、失活的物质的灭菌，如维生素。干热灭菌将待灭菌的器Ⅲ,用纸包好或放在特定的容器内,置于烘箱中,在 160左右保持2 h。适用于培养Ⅲ等玻璃器血的灭菌。6.4.6平板和斜面的制备在无菌条件下把冷却至 45℃左右的培养基倒人无菌培养Ⅲ内