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SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4419.21—2016出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法第21部分:牛奶Food allergen detection with LAMP methods for export-Part 21: Milk2016-03-09发布2016-10-01实施中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局
SN/T 4419.21—2016前言SN/T4419《出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法》由下列部分组成:第1部分:开心果;第2部分:腰果;第3部分:胡桃;-第4部分:榛果;第5部分:杏仁;一第6部分:扁桃仁;第7部分:巴西坚果;第8部分:澳洲坚果;第9部分:栗子;一第10部分:大豆;第11部分:羽扇豆;第12部分:花生;第13部分:葵花籽;第14部分:芝麻;第15部分:大麦;第16部分:小麦;第17部分:荞麦;第18部分:芥末;第19部分:胡萝卜;第20部分:芹菜;-第21部分:牛奶;第22部分:虾。本部分为SN/T4419的第21部分,本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位:中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国北京出人境检验检疫局。本部分主要起草人:曾静、张西萌、魏海燕、付溥博、陈颖、马丹、刘莉、赵晓娟。I
SN/T 4419.21—2016出口食品常见过敏原LAMP系列检测方法第21部分:牛奶1'范围SN/T4419的本部分规定了出口食品中过敏原牛奶成分的环介导等温扩增(LAMP)检测方法。本部分适用于食品及其原料中过敏原牛奶成分的定性检测。本部分所规定方法的最低检测限(LOD)为0.5%(质量分数)。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法GB/T274032008实验室质量控制规范食品分子生物学检测3术语、定义和缩略语3.1术语和定义下列术语和定义适用于本文件。3.1.1过敏原allergen又称致敏原或变应原,是指能够引起变态反应的抗原。3.1.2牛奶milk一种白色的液体,由哺乳动物的乳腺分泌而来,是初生哺乳动物的主要食物来源,其中β-乳球蛋白是牛奶致敏的主要成分。3.2缩略语下列缩略语适用于本文件。dNTP:脱氧核糖核苷三磷酸(deoxyribonucleosidetriphosphate)LAMP:环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification)Triton X-100:聚乙二醇辛基苯基醚4防污染措施环介导等温扩增检测过程的防污染措施应符合GB/T27403一2008中附录D的规定。5方法提要样品经浓缩后,提取DNA,以DNA为模板,采用牛线粒体细胞色素b(cyt-b)基因特异性检测引物1
SN/T4419.21—2016进行LAMP扩增,通过颜色变化观察判定是否存在过敏原牛奶成分。6LAMP检测方法6.1原理根据牛线粒体细胞色素b基因序列设计特异性内引物、外引物各一对以及一条环引物,特异性识别靶序列上的7个独立区域,利用BstDNA聚合酶启动循环链置换反应,在线粒体特异靶序列启动互补链合成,在同一链上互补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构的茎-环DNA混合物;从dNTP析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的Mg²+结合,产生副产物(焦磷酸镁)形成乳白色沉淀,加人显色液,即可通过颜色变化观察判定结果。显色液显色原理:SYBRGreenI是一种结合于所有dsDNA双螺旋小沟区域的具有绿色激发波长的染料。在游离状态下,SYBRGreen·I发出微弱的荧光,但一且与dsDNA结合后,荧光大大增强。因此,SYBR Green 的荧光信号强度与dsDNA的数量相关,可以根据荧光信号检测出LAMP反应体系存在的dsDNA数量。6.2仪器和设备6.2.1水浴锅或加热模板:65℃±1℃和80℃±1℃。6.2.2离心管:0.1mL、1.5mL。6.2.3计时器。6.2.4移液枪:量程0.5μL~10μL、量程10μL~100μL、量程100μL~1000μL。6.3试剂和材料除另有规定外,所有试剂均为分析纯或生化试剂。6.3.1实验用水:应符合GB/T6682中一级水的规格。6.3.2 CTAB 提取缓冲液(20 g/L CTAB,1.4 mol/L NaCl,0.1 mol/L Tris-HCl,0.02 mol/L Naz EDTA,pH8.0)。6.3.3 CTAB沉淀液(5 g/L CTAB,40 mmo
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