基于sr基因分型技术的遗传分析.docxVIP

基于sr基因分型技术的遗传分析 性别基因座是牙齿蛋黄素编码的基因，是x和y染色体的同源基因。x和y染色体的特别pcr可以同时获得106株和112株牙齿的特定产物。 1 数据和方法 1.1 创建实验单位5f 亲子鉴定受检者争议父31岁(实验室编号:160135F)，母27岁(实验室编号:160135M)，子2岁(实验室编号:160135C)。采用常规Chelex-100法提取3人新鲜血(EDTA抗凝)的DNA。 1.2 ssf1po扩增 先用PowerPlex 18D System试剂盒(美国AB公司)分别对D3S1358、TH01、D21S11、D18S51、PentaE、D5S818、D13S317、D7S820、D16S539、CSF1PO、Penta D、vWA、D8S1179、TPOX、FGA、D19S433和D2S1338共17个STR基因座以及性别基因座(Amelogenin)进行PCR复合扩增。按照所用试剂盒说明书进行操作，扩增产物使用Applied Biosystems 3130型遗传分析仪(美国AB公司)进行毛细管电泳分型，使用Gene Mapper 3.2软件处理电泳数据，确定样本DNA中各个基因座的等位基因型。应用MicroreaderTM 23 ID System(MR23体系)试剂盒再次验证分析结果。 1.3 色体及染色体核型分析 进行外周血淋巴细胞培养，常规制备染色体，进行G显带处理，分析染色体核型。染色体核型分析标准依照《人类细胞遗传学国际命名体制2013版》。 2 结果 2.1 常染色体遗传位点 依据孟德尔遗传规律，孩子的遗传基因一半来自生母，一半来自生父。检验结果显示，160135C与160135M的常染色体上遗传基因符合孟德尔遗传规律，而160135C与160135F在D21S11、D18S51、PentaE、D5S818、D7S820、D16S539、D8S1179、TPOX、D2S1338等9个遗传位点不符合孟德尔遗传规律，可排除亲生血缘关系。见表1。 2.2 genin基因座xy基因型峰高比值 争议父存在STR分型时Amelogenin基因座上荧光信号强度异常，其Amelogenin基因座XY基因型峰高比值(矮峰的相对荧光单位除以高峰的相对荧光单位)和峰面积比值均约为1.6(见图1)。Ladder(等位基因分型标准品)和健康男性(160136F)Amelogenin基因座分型是峰高比值约为1的XY基因型(见表2)。 2.3 超数x体染色体 外周血染色体核型分析结果显示，争议父160135F染色体核型为47,XXY，其性染色体存在一条超数X染色体，即由2条X染色体和1条Y色体组成。见图2。 3 克氏综合征的诊断 目前公认并被广泛使用的亲子鉴定方法是采用STR等位基因分型技术对Amelogenin基因座分型进行性别鉴定，STR等位基因分型技术在遗传学、法医学、干细胞移植监测、胎儿产前诊断等领域已得到广泛使用 克氏综合征是一种男性先天性疾病，发病率约为1‰，其常见染色体异常，比正常男性多一条X染色体，患者的主要临床表现为无精、少精和不孕。目前，克氏综合征的确诊主要依赖于细胞染色体核型分析，该方法细胞培养周期长，操作繁琐，用血量多、分辨率较低。胡锡阶等 本研究在亲子鉴定中，对争议父160135F的常染色体和性染色体进行了STR分型检测，采用两种试剂体系检测的结果(PowerPlex 18D System试剂盒、MR23体系试剂)均显示，其Amelogenin性别基因座分型异常，X等位基因峰高约为Y等位基因峰高的1.6倍;STR结果中X和Y峰面积不对称或峰高明显不一致，表明争议父染色体数目存在异常