NY_T 2947-2016枸杞中甜菜碱含量的测定 高效液相色谱法.pdf

ICS 65.020.01B 04NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 2947-2016枸杞中甜菜碱含量的测定高效液相色谱法Determination of betain in wolfberry--HPLC method2016-10-26 发布2017-04-01实施中华人民共和国农业部5发布 NY/T 2947—2016前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草本标准由农业部种植业管理司提出并归口。本标准起草单位：农业部构杞产品质量监督检验测试中心。本标准主要起草人：王晓菁、牛艳、吴燕、姜瑞、张锋锋- NY/T 2947—2016枸杞中甜菜碱含量的测定高效液相色谱法1范围本标准规定了枸杞中甜菜碱的测定方法，本标准适用于枸杞中甜菜碱含量的测定本方法检出限为0.001g/100g。2规范性引用文件下列文件对于本义件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用义件，仅注日期的版本适用于本义件。凡是不注日期的引用文件.其最新版本（包括所有的修改单)适用于本义件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法3原理枸杞样品中甜菜碱组分经甲醇溶液L4(CH（)H-H（)）=2.5+7.5]提取后，用混合型阳离子交换固相萃取柱净化，再用乙睛溶液L(CH:CN-H.（))=7.5+2.5］定容.最后用配有紫外检测器的高效液相色谱仪在波长205nm处测定，根据色谱峰的保留时间定性，外标法定量。4试剂与材料除非另有说明.在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T6682中规定的一级水。4.1氨水：含量为25%~28%.优级纯。4.2盐酸：含量为36%~38%，优级纯4.3甲醇(CH;OH)：色谱纯。4.4乙（CH.CN）：色谱纯。4.5盐酸溶液c（HCl)=0.1mol/L:准确吸取9ml.盐酸.加适量水并稀释定容至1000ml。4.6甲醇溶液［(CH:()H-H,())=2.5+7.5]:取25ml甲醇慢慢加人75ml.水中。4.7E甲醇溶液（CH:(H-H.0))=8.5十1.5]：取85ml.甲醇慢慢加入15ml.水中。4.8氨化甲醇溶液［y(NH：·H.（）-CH（)H)=0.5十9.5]：取5mL浓氨水慢慢加入95ml.水中。4.9乙晴溶液y（CH.CN-H，）=7.5十2.5］：取75ml.乙睛慢慢加人25mL水中。4.10甜菜碱标准品：≥纯度98%。4.11甜菜碱标准储备液溶液：准确称取甜菜碱标准物质100mg（精确到0.0001g）用乙溶液（4.9)溶解并定容至10.0ml.配制成10.0mg/ml.标准储备液.0℃～4℃览存。4.12阳离子交换固相萃取小柱：混合型阳离子交换固相萃取柱.基质为聚苯乙烯一二乙烯基苯高聚物，150mg/6ml，或相当者5仪器与设备5.1液相色谱仪：配有紫外检测器。5.2分析天平：感量士0.0001g。5.3离心机：4000r/min。 NY/T2947—20165.4涡旋混合器。5.5组织捣碎机：12000r/min。5.6均质器：24000r/min。5.7高速万能粉碎机：10000r/min。5.8旋转蒸发仪。5.9微孔滤膜：0.45μm，有机相。6试样制备干样（枸杞）：实验时将一18℃冷冻保存的样品取出.立即用高速万能粉碎机（可加少量液氮）粉碎（30g样品粉碎时间约为20s），置于样品瓶中，一18℃冷冻备用。鲜样（枸杞）：样品用组织捣碎机制成匀浆（200g样品匀浆时间约为30s），置于样品瓶中，一18℃冷冻备用。7分析步骤7.1提取称取枸杞干样0.2g或鲜样1g（精确到0.001g）于50mL离心管中。加入25.0ml甲醇溶液（4.6），涡旋混匀1min，再均质提取2min，以3500r/min离心5min，取出备用。7.2净化吸取上清液5.00mlL转人已活化平衡的混合型阳离子交换固相萃取柱中，控制1滴/s的流速，待样液进人苯取小柱的吸附层后，依次用5ml.甲醇溶液（4.7）、5mL甲醇进行淋洗，弃去淋洗液。最后用5ml氨化甲醇（4.8)进行洗脱并收集、重复洗脱1次。将洗脱液旋转浓缩近干，用2.00mL乙睛溶液（4.9）溶解定容，经0.45um滤膜过滤，待测，混合型阳离子交换固相萃取柱使用前依次用5ml.甲醇、5mL0.1mol/L盐酸溶液活化平衡。7.3色谱参考条件色谱柱：亲水作用多孔硅胶色谱柱，150mm×4.6mm(i.d），5um，或相当者；流动相：乙一水，梯度洗脱；流速：1.0mL/min;柱温：30℃；波长：205nm;进样量：10.0ulL；流动相梯度洗脱程序见表1。表1流动相梯度洗脱程序时间.min水.%乙腈.%5095210903307045050950501059515 5957.4标准曲线的绘制用乙睛溶液（4.9)将甜菜碱标准贮备液溶液逐级稀释得到浓度为0g/1