SN_T 1961.9-2013出口食品过敏原成分检测 第9部分：实时荧光PCR方法检测杏仁成分.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 1961.9--2013出口食品过敏原成分检测第9部分：实时荧光PCR方法检测查仁成分Detection of allergen components in food for export-Part 9 : Real time PCR method for detecting almond components2013-09-16实施2013-03-01发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局 SN/T 1961.9—2013前言SN/T1961《出口食品过敏原成分检测》共分为19部分：第1部分：酶联免疫法检测花生成分；第2部分：实时荧光PCR法检测花生成分；11第3部分：酶联免疫吸附法检测荞麦蛋白成分；第4部分：实时荧光PCR方法检测腰果成分；第5部分：实时荧光PCR方法检测开心果成分；第6部分：实时荧光PCR方法检测胡桃成分；第7部分：实时荧光PCR方法检测胡萝卜成分；第8部分：实时荧光PCR方法检测榛果成分；第9部分：实时荧光PCR方法检测杏仁成分；第10部分：实时荧光PCR方法检测虾/蟹成分；第11部分：实时荧光PCR方法检测麸质成分；第12部分：实时荧光PCR方法检测芝麻成分；第13部分：实时荧光PCR方法检测小麦成分；一第14部分：实时荧光PCR方法检测鱼成分；第15部分：实时荧光PCR方法检测芹菜成分；第16部分：实时荧光PCR方法检测芥末成分；第17部分：实时荧光PCR方法检测羽扇豆成分；第18部分：实时荧光PCR方法检测荞麦成分；第19部分：实时荧光PCR方法检测大豆成分。本部分为SN/T1961的第9部分。本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、中华人民共和国天津出人境检验检疫局。本部分主要起草人：张宏伟、张海英、刘培、吴冬雪、张霞、赵良娟、高旗利、郑文杰、陈颖、徐宝梁。 SN/T 1961.9—2013出口食品过敏原成分检测第9部分：实时荧光PCR方法检测杏仁成分1范围SN/T1961的本部分规定了食品中过原查仁成分的实时荧光PCR检测方法。本部分适用于食品及其原料中过敏原查仁成分的定性检测。本部分所规定方法的最低检出限（LOD)为0.01%（质量分数）。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的用文件-仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改单)适用于本这件。GB/T6682分析实验室用水规格和实验方法GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测3定义和术语下列术语和定义适用于本文件。3.1过敏原allergen又称致敏原或变应原，是指能够引起变态反应的抗原。3.2杏仁 almond本标准中杏仁包括两种植物，其一为扁桃仁(Prunus dulcis 即国内通常称之为美国大杏仁，是植物扁桃的种子,其属于蔷薇科、李亚科、桃属、扁桃种；另种为小香仁（Prunus Armeniaca)即普通杏的种子，属于蔷薇科、李亚科、杏属。3.3实时荧光 PCR real time PCR在PCR反应体系中加人荧光基团，利用荧光信号的积累实时监控整个PCR扩增过程。3.4Ct 值 cycle threshold每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。4　方法提要样品经研磨后，提取DNA，以DNA为模板，采用杏仁 Pru dul 基因序列的特异性检测引物和探针进行实时荧光PCR扩增，根据Ct值，判断样品中是否存在过敏原杏仁成分。1 SN/T 1961.9--20135 试剂和材料除另有规定外，试剂为分析纯或生化试剂。实验用水应符合GB/T 6682中一级水的规格。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。5.1检测用引物(对)序列和探针杏仁成分扩增引物和探针、内参照(真核生物成分)引物和探针详见表1。表 1试验用引物和探针名称序列(5′-3)目的基因内参照5端引物TCTGCCCTATCAACTTTCGATGGTA真核生物内参照3端引物AATTTGCGCGCCTGCTGCCTTCCTT18SrRNA基围内参照探针FAM-CCGTTTCTCAGGCTCCCTCTCCGGAATCGAACC-TAMRA杏仁5端引物TTTGGTTGAAGGAGATGCTC杏仁 Pru du!杏仁3′端引物TAGTTGCTGGTGCTCTTTATG基因杏仁探针FAM-TCCATCAGCAGATGCCACCAAC-Eclipsc5.2 CTAB缓冲液:55 mmol/L CTAB,1 400 mmol/I. NaC1,20 mmol/I EDTA.1