SNT 2033-2007绵羊地方性流产病微量补体结合试验操作规程.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2033-2007绵羊地方性流产病微量补体结合试验操作规程Protocol of micro-complement fixation test for enzootic abortion of ewes2007-12-24 发布2008-07-01实施中华人民共和国发布宠城国家质量监督检验检疫总局数码防伪 中华人民共和国出人境检验检疫行业标准绵羊地方性流产病微量补体结合试验操作规程SN/T 2033---2007中国标准出版社出版北京复兴门外三里河北街16号邮政编码：100045网址 www.spc. 电话：6852394668517548中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷*开本880×1230　1/16印张0.75　字数15千字2008年3月第一版　2008年3月第次印刷印数 1—2000*书号：155066·2-18507 SN/T 2033—2007前言本标准的附录 C、附录 D为规范性附录,附录 A、附录 B为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国天津出人境检验检疫局。本标准主要起草人：王玉玲、侯艳梅、姜红、赵祥平、董志珍、霍蕾。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 2033-2007绵羊地方性流产病微量补体结合试验操作规程 范围1本标准规定了绵羊地方性流产病微量补体结合试验的操作技术要求。本标准适用于绵羊地方性流产病的血清学诊断。2规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。瓦是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。GB/T 6682　分析实验室用水规格和试验方法(neq ISO 3696)3试剂和材料3.1 试剂3.1.1试验用蒸馏水为 GB/T 6682中的三级水。3.1.2稀释液:生理盐水。3.1.3补体结合抗原：按说明书使用，使用前充分摇勾3.1.4阳性对照血清：使用前用蒸馏水溶解至规定容积。3.1.5阴性对照血清：使用前用蒸馏水溶解至规定容积。3.1.6溶血素：使用前用蒸馏水溶解至规定容积。补体：使用前用蒸馏水溶解至规定容积。.8绵羊全血：选健康成年绵羊，无菌颈脉采血，1.2份阿氏液加1份血，混匀，4℃冰箱内稳定3d～~5 d后使用。3.2材料3.2.1玻璃试管：10 mm×75mm，圆底，洁净。3.2.2试管架。3.2.3微量移液器。3.2. 4可调连续加样器。3.2.596孔“U”型微量板。3.2.696孔平底(L)微量板。3.2.7水平转子离心机。3.2.8ELISA读板仪。3.3被检血清3.3. 1 采血和分离按常规方法采血和分离血清。血清应新鲜，无蛋白絮凝物，无溶血，无腐败气味。3.3.2运送和保存血清防止血清冻结，若3d内不能送到实验室，需用冷藏方法运送血清。血清应放至 4℃冰箱内保存。1 SN/T 2033--20074操作方法4.1预备试验4.1.13%红细胞悬浮液的制备绵羊全血充分混匀后，取所需量用稀释液洗三次，每次水平转子离心机2000 r/min离心5 min,最后一次离心10 min。取出1份沉积血泥加入到24份稀释液中，充分混匀，制成红细胞悬浮液。取出250μL红细胞悬浮液加人到4.75mL蒸馏水中，使红细胞充分破解（液体清亮）。取出100μL破解后的液体加人到平底微量板孔内，平行加8个孔。用ELISA读板仪540 nm下读OD值，算出平均OD值，代入校正红细胞浓度公式E见式(1)：bXc(1)a=0. 115式中:校正红细胞浓度到3%所需加入的稀释液量；ab--平均 OD值;红细胞悬浮液量。取校正红细胞浓度时所需的稀释液量加人到红细胞悬浮液中即得 3%红细胞悬浮液。4.1.2溶血素效价的测定 稀释溶血素取0.2mL溶血素原液,加人到19.8mL稀释液中，制成1：100稀释的溶血素，再按表1稀释成不同稀释滴度的溶血素。表 1 溶血素的稀释稀释液/mL稀释滴度溶血素量 /mL4. 01 : 500(1：100溶血素)1.018.01: 1 000(1：100溶血素)2.07.01:1500(1：100溶血素)0.59.5(1 ：100 溶血素)0.51:2 0002. 01: 3 000(1：1000溶血素)1.04. 0(1:1000 溶血素)1.01: 5 0009.01: 10 000(1：1000 溶血素)1.0注：如果溶血素是由等量甘油保存,则溶血素原液所需量加倍,并相应减少稀释液量。制备不同稀释滴度的溶血素致敏红细胞取7个试管,每管加1.5mL 3%的红细胞悬浮液，然后分别缓慢加人