丙烯腈接触工人外周血淋巴细胞常规微核法与核糖法检测结果比较.docxVIP

丙烯腈接触工人外周血淋巴细胞常规微核法与核糖法检测结果比较 人类下肢微核作为一种测量遗传损伤的指标，已被广泛用于人类遗传损伤的检测。有报道认为,在体外测试方法中,由γ射线引起的遗传损伤用双核细胞微核(CB)法检测比常规微核(MN)法更敏感,而对某些化学物质,CB法并不比常规法敏感。究竟哪一种方法更适合接毒人群遗传损伤的检测,目前尚未见报道,我们利用二种方法对接触丙烯腈(AN)的工人进行了微核测试,并进行了比较。 1 对象和方法 1.1 an从业工人微核试验 本次研究是对同一车间同一人群接触丙烯腈的工人在职业性体验时分二次进行微核测试。第一次是1996年12月,检测了90名AN从业工人,年龄平均为(34.06±7.74)岁,工龄平均为(11.42±6.03)年,进行常规微核测试。第二次是1997年12月,同一人群中检测了76名AN从业工人,年龄平均为(39.83±8.14)岁,工龄平均为(14.62±6.70)年,进行细胞分裂阻滞微核法测试。 1.2 方法 1.2.1 giemsa染色 静脉采血去除纤维蛋白后加3%明胶自由沉降,上清液离心,以沉淀物推片,甲醇固定后用Giemsa染色。油镜下计数1 000个完整淋巴细胞,计算微核细胞的千分率。 1.2.2 细胞松驰素b培养 肝素抗凝外周静脉血,接种于RPMI 1640培养液中,37 ℃培养44小时,加细胞松驰素B(cytochalasin B),终浓度6 μg/ml,继续培养至72小时。常规制片,Giemsa染色,油镜下对每个受试者计数1 000个完整的双核淋巴细胞,计算双核细胞微核千分率。 2 mcn法与cb法微核率变化 两次测试的结果按接触AN工龄分组,每组平均微核率见表1。 以AN接触工龄10年为界分组,两次测试的平均微核细胞率见表2。 从表中可看出,AN接触工龄0~20年期间,随着工龄的增加,AN接触工人其微核率MN法与CB法均逐渐增加。MN法的相关系数为r=0.95,CB法r=0.98,两种测定方法均有极显著的统计学意义(P0.01)。但接触工龄超过20年后,MN法与CB法微核率不再上升,都呈相对稳定,既有一平台期。MN法在AN接触工龄超过10年后,其微核率明显上升,而CB法在AN接触工龄超过5年后,其微核率已明显上升,超过10年后,其微核率极明显增加。 3 职业性an接触中微核试验检测的应用 在本次研究中,同一接触AN人群分二次用不同的微核测试方法检查,得到了基本一致的结果。MN法与CB法的微核率均随AN接触工龄增加而上升,说明长期接触AN的遗传毒性作用有累积作用。在AN接触工龄超过20年后,其微核率有一平台期,说明AN接触工龄超过20年后,其微核发生率有稳定在一定水平的趋势。 本次研究表明,CB法在AN接触工龄超过5年后其微核率已明显上升,而MN法则在AN接触工龄超过10年后其微核率才明显上升,看来在职业性AN接触中,CB法似较MN法敏感,结果与Fenech和Carita Lindholm的报道一致。在研究中可发现,AN接触工人的微核率与接触工龄之间,用二种方法均存在很好的相关性。 在以10年分组的比较中,MN法与CB法都呈显著改变,说明在长期接触AN人群的遗传损伤监护中,MN法与CB法都是有效的检测手段。我们在实验过程中发现,同样计数1 000个细胞。实际上对CB法已是2 000个细胞,故CB法的千分率绝对值要比MN法的千分率绝对值大一倍以上,这样可减少误差。另外,镜检时CB微核较常规微核更易识别,能减少误差。但MN法也有其优点,即简便,省时,价格低廉。因此我们建议在条件许可下,最好用CB法检测,以能提高结果的准确度及遗传损伤的敏感性。 吸烟可诱发人外周血淋巴细胞微核率的增加。我们以前的研究表明,经分层分析发现,在职业性AN接触人群中,吸烟对微核的诱发作用不明显,AN在微核诱因中占主导地位。