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15种丙型肝炎elisa检测方法的质量评价 自1989年发现丙酸酯病毒（hcv）以来，许多研究促进了各种hcv检测方法的建立和发展。HCV酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)诊断试剂(HCV ELISA)现已发展到第三代,广泛应用于血液筛查及临床诊断等领域。HCV胶体金法诊断试剂也因其快速、简便的优点,逐步在医学检验实验室中普及。由于HCV ELISA和胶体金试剂在检测实验室的大量使用,对其进行质量评估具有一定意义。 1 材料与方法 1.1 验证血清盘包括:参比室基础血清盘、参比室干扰血清盘、商业阳转血清盘。参比室基础血清盘由国家艾滋病参比实验室提供,样品均来自于献血员,样品的抗-HCV反应性由两种进口抗-HCV ELISA试剂和MPue617 Diagnositics HCV Western Blot Assay 3.0(MP HCV)或CHIRONue617 Recombinant Immunoblot Assay 3.0(RIBA)确定。商业阳转血清盘购自美国BBI公司,由4套阳转血清盘组成,编号分别为PHV906、PHV908、PHV910、PHV914,共33份样本,每套血清盘均由处于抗-HCV血清转换期的单个个体的一系列连续血浆样本组成,标准检测结果由BBI公司的说明书提供。参比室干扰血清盘由国家艾滋病参比实验室提供的献血员血浆样本组成,共40份样本,所有样本均为抗-HCV阴性,但每份样本至少为抗-HIV、HBsAg或梅毒抗体一项阳性。 1.2 试剂所评估试剂均由市场采购,包括15种丙肝ELISA试剂和8种丙肝胶体金试剂。ELISA试剂依次用字母A-O表示,其中N、O为进口试剂;胶体金试剂依次用罗马数字Ⅰ-Ⅷ表示。 1.3 仪器设备Fluido 洗板机、安图酶标仪2010、Memmer恒温箱。 1.4 评估方法所有试剂操作及结果判读均严格按照厂家说明书执行。实验前将试剂和样品随机放置,以实现双盲操作。HCV ELISA试剂的评估采用参比室基础血清盘、参比室干扰血清盘、商业阳转血清盘进行;HCV胶体金试剂的评估仅使用参比室基础血清盘和参比室干扰血清盘。根据不同验证血清盘的检测结果,分别评估试剂的阳性符合率、阴性符合率、分析灵敏度、分析特异性。 1.5 质量控制HCV ELISA试剂评估使用的室内质控品由国家艾滋病参比实验室提供。试验过程中,每次操作均检测质控品和样本。此外,为保证实验室人员的操作水平,试剂评估前期,操作人员随机抽取HCV ELISA试剂和胶体金试剂各两种,对20支美国病理学家协会(CAP)能力验证血清盘进行检测(阴性、阳性各10支)。 2 结果 方法学评估前,对美国CAP血清盘的检测结果均与标准结果一致,说明所有操作人员的操作水平达标。对室内质控品的检测,所有试验均有效,评估的试验结果真实可靠。 2.1 参比室基础血清盘基础血清盘用于验证试剂的阳性符合率、阴性符合率。13种国产ELISA试剂中,除试剂F阴性符合率和试剂K的阳性符合率为97.5%(39/40)以外,其余试剂的阳性符合率和阴性符合率均可达到100%。两种进口试剂N、O的阳性符合率和阴性符合率均为100%(40/40)。与进口试剂N、O比较,国产试剂的阳性符合率、阴性符合率无明显差异。8种丙肝胶体金试剂中,试剂Ⅱ、Ⅳ、Ⅴ的阳性符合率分别为92.5%(37/40)、82.5% (33/40) 、92.5%(37/40),其余试剂阳性符合率均为100%(40/40);阴性符合率除试剂Ⅲ为97.5%(39/40)外,其余均为100%(40/40)。其阳性符合率与ELISA试剂有一定的差异。 2.2 商业阳转血清盘阳转血清盘的评价指标用平均延长天数表示,平均延长天数为4套血清盘延长天数的均值,评价结果见表1。15种HCV ELISA试剂的平均延长天数分布在8-19天之间,对PHV 906、PHV 908、PHV 910盘检出阳性晚于RIBA 3.0的,分别有1种(试剂K)、13种、3种(试剂D、H、L)。对PHV 914的检测中,除试剂J检出阳性的时间与RIBA相同外,其余试剂均早于RIBA。RIBA检测为阳性,ELISA试剂未检出的样本主要集中在PHV 908盘中,该盘中第5支样本为HCV NS3抗体和HCV NS4抗体弱阳性,仅试剂F、N对此样本检测为阳性。PHV 906盘中第1、2支样本为NS3单带强阳性、NS4带+/-,第1支样本有6种试剂检测阳性,第2支样本有13种试剂检测阳性。PHV 914盘中第5、6支样本为Core单带阳性,第5支样本有6种试剂检出阳性,第6支样本有11种试剂检出阳性。 2.3 参比室干扰血清盘干扰血清盘用于评价试剂的分析特异性,检验抗-HIV、HBs