NYT 974-2006柑橘苗木脱毒技术规范.pdf

ICS 65.020B 61NY中华人民共和国农业行业标准NY/T 974-2006柑橘苗木脱毒技术规范Criteria for the propagation of citrus virus-free budling2006-01-26 发布2006-04-01实施中华人民共和国农业部发布 NY/T 974—2006前言本标准的附录 A是规范性附录、附录 B和附录 C 是资料性附录。本标准由中华人民共和国农业部提出并归口。本标准起草单位：中国农业科学院柑橘研究所、湖南农业大学、重庆市果树研究所、广西柑橘研究所和农业部柑橘及苗木质量监督检验测试中心。本标准主要起草人：周常勇、蒋元晖、赵学源、唐科志、杨方云、李太盛、肖启明、李隆华、白先进。 NY/T 974--2006柑橘苗木脱毒技术规范1 范围本标准规定了国内柑橘苗木的脱对象、脱毒技术、脱毒效果检测和质量要求。本标准适用于甜橙、宽皮柑橘、柚、葡萄柚、柠檬、来檬、枸檬（佛手）、酸橙和金柑以及有关杂交种苗木的脱。2 引用标准下列文件中的条款通过本标的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容)或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件,其最新版本适用于本标准。GB 5040柑橘苗木产地检疫规程3术语和定义3.1柑橘苗木 citrus budling指嫁接苗,接穗和砧木组合的苗木。3.2病毒病和类似病毒病害virus and virus-like diseases由病毒、类病毒、植原体、螺原体和某些难培养细菌引起的植物病害。3.3脱毒 virus exclusion采取一定的技术措施，从受病毒病或类似病毒病害感染的植株得到无病后代植株的过程。3.4茎尖嫁接 shoot-tip grafting将嫩梢的生长点连同2个～3个叶原基，大小约0.14mm～0.18mm的茎尖嫁接于试管内生长的砧木上的过程。3.5指示植物indicator plant受某种病原物侵染后能敏感地表现具有特征性症状的植物。4 脱毒对象4.1 柑橘黄龙病病原细菌(Candidatus Liberobacter asiaticus)4.2柑橘裂皮病类病毒(Citrus exocotis viroid， CEV)4.3 柑橘碎叶病毒(Citrus tatter leaf virus, CTLV)4.4柑橘衰退病毒(Citrus tristeza virus，CTV)引起柚矮化病和甜橙茎陷点病的株系。4.5温州蜜柑萎缩病毒(Satsuma dwarf virus，SDV)5 脱毒技术5.1应用湿热空气处理脱除柑橘黄龙病1 NY/T 974—2006按GB5040执行。5.2应用茎尖嫁接技术脱除柑橘黄龙病和柑橘裂皮病5.2.1器材超净工作台、高压消毒锅、恒温箱、光照培养箱、高倍体视显微镜、酒精灯、镊子（长25cm及10cm各1把）、蒸尖嫁接刀（自制，用宽约6mm的竹片顶端夹住双面刀片的尖头碎片，用棉线捆牢）、试管（口径25mm,长150mm)及棉塞、培养Ⅲ（直径10.5cm及6.5cm)和烧杯。5.2.2茎尖嫁接在无菌条件下操作5.2.3茎尖嫁接前用品准备培养基固体、液体 MS培养基按附录 A配方配制，装人试管，每管约20 ml。试管在装人液体培养基前，需在管底放人滤纸桥(用约9cm直径的圆形滤纸,中央剪0.5cm见方的孔，成圆柱形,放人管内,孔朝上)用以支撑茎尖嫁接苗。滤纸桥高度与液体培养基的液面平。操作垫纸用白纸裁成64开大小，10张成叠，外用16开纸包扎。茎尖嫁接刀将自制的茎尖嫁接刀10把～15把扎成一捆放人试管内，刀尖朝下，悬空。管底垫少量棉花及纸以防刀尖接触管壁。管口用牛皮纸封住。培养Ⅲ每个用牛皮纸包被，打捆，或放人烧杯，用牛皮纸封口。培养基和其他用品的消毒将、、、各项用品放人高压消囊锅内消毒。消毒温度为121℃，持续 20min。其中,茎尖嫁接刀须用有套层的高压蒸汽消毒器消毒，以达到消毒物品干燥的要求,避免刀口生锈,影响嫁接成活。5.2.4砧木准备砧木常用积橙或积的实生苗。剥去种子的内、外种皮,放入直径为10.5cm的培养皿,用0.5%次氯酸钠液(加0.1%吐温20)浸10min,无菌水洗3次,每次 1min～2min,播于试管内 MS固体培养基上，每管1粒～3粒,在27℃黑暗中萌发、生长，两周后可供茎尖嫁接。如暂时不用，试管罩上塑料袋,直立放人4℃～8℃冰箱内备用。5.2.5茎尖准备采1cm～2cm长的健壮嫩梢,摘除下部较大叶片，放人直径为6.5cm的培养Ⅲ,经0.25%次氯酸钠液(加0.1%吐温20)浸5min,无菌水洗3次,每次1min～2min,备用。5.2.6茎尖嫁接高倍体视显微镜