SNT 2008-2007进出口果汁中棒曲霉毒素的检测方法 高效液相色谱法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 2008—2007进出口果汁中棒曲霉毒素的检测方法高效液相色谱法Determination of patulin in fruit juice for import and export-HPLC method2008-07-01实施2007-12-24 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局数码防伪 SN/T 2008—2007前言本标准附录 A和附录 B为资料性附录。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国陕西出入境检验检疫局。本标准主要起草人：孔祥虹、李建华、乐爱山、何学文、张莹、何强。本标准系首次发布的出人境检验检疫行业标准。 SN/T 2008--2007进出口果汁中棒曲霉毒素的检测方法高效液相色谱法1范围本标准规定了果汁中棒曲霉毒素检验的高效液相色谱测定方法。本标准适用于苹果汁和梨汁中棒曲霉毒素含量的测定。2方法提要果汁(浊汁要用果胶酶预处理)中-的棒曲霉毒素经乙酸乙酯萃取，萃取液用碳酸钠溶液净化后，经无水硫酸钠脱水，用液相色谱仪配紫外或二极管阵列检测器测定，外标法定量。3试剂和材料除另有规定外，试剂均为分析纯，水为超纯水。3.1乙醇：液相色谱纯。3.2 冰乙酸。3.3乙腈：液相色谱纯。3.4乙酸乙酯。3.5重铬酸钾。3.6浓硫酸：0.009 mol/L，1mL浓硫酸用水稀释至2果胶酶溶液（endogalacturonase):活度为/l:400:U/g。活度定义：在pH3.4和25℃时，1%的果胶3.7:溶液在酶的催化作用下,5min丙粘度降低 29%所需果胶酶的量3.8无水硫酸钠：经650℃灼烧4h，置于干燥器内备用3.9碳酸钠溶液：15g/L，115g无水碳酸钠溶于：160mL永中3.10pH4.0水：重蒸馏水，用乙酸调节至/pH为4.03.11棒曲霉毒素标准品：纯度大手等于39%。3.12棒曲霉毒素标准储备液：用5mL乙酸乙酯溶解5mg棒曲霉毒素后，移人25mL的容量瓶，乙酸乙酯定容至刻度，配成浓度约海200 μg/mL的标准储备液，在-720℃冷冻保存。棒曲霉毒素标准溶液浓度的标定参见附录 A。3.13棒曲霉毒素标准工作液：取500 μL的经标定过的棒曲霉毒素标准溶液（相当于 5 μg），用氮气吹干后溶解于5 mL pH4.0水中，配成浓度为1 ug/mL，根据需要再用 pH4.0水稀释，配成适当浓度的标准工作液。4仪器和设备4.1高效液相色谱仪：配紫外或二极管阵列检测器。4.2 离心机:5 000 r/min。4.3离心管:50 mL,具塞。4.4旋转蒸发器。 SN/T 2008--20074.5分液漏斗：150mL。4.6微量可调移液器:50 μL,200 μL,1 000μL4.7 滤膜:0.45 μm。4.8水浴锅;可调温。4.9旋涡混匀器。4.10阿贝折光计。5试样制备与保存将所取试样充分混匀后，分取出约1kg代表性样品，均分成两份，装人洁净的容器内，作为试样。密封并标明标记。将试样于4℃条件下避光保存。注：在制样的操作过程中，应防止样品受到污染或发生棒曲霉毒素含量的变化。6测定步骤6.1样品处理浓缩果汁（稀释至可溶性固形物为 11.5 Brix）和清汁不需要酶处理。取浊汁 20 mL（准确至0.1mL)于 50mL离心管中，加人150 μL果胶酶溶液，在旋涡混匀器上混匀2min,在50℃水浴锅中加热 1 h,于 4 000 r/min离心 5 min。6.2提取和净化量取10mL(准确至0.1mL)试样（浊汁经酶解处理），置于50mL离心管中,加人20mL乙酸乙酯振摇提取1 min,静止分层，分出水相于另一个 50 mL离心管中，再用乙酸乙酯提取水相两次，每次20 mL。弃去水相，合并三次乙酸乙酯提取液于分液漏斗中，加人 4.0 mL碳酸钠溶液，立即振摇0.5 min，静止分层（棒曲霉毒素在碱性溶液不稳定，因此，净化操作应尽快，以免损失）。_上层有机相过装有15g无水硫酸钠的漏斗至浓缩瓶中;碳酸钠水层用10mL乙酸乙酯提取一次,弃去碳酸钠水层，过无水硫酸钠柱至浓缩瓶中，在40℃水浴中用旋转蒸发器浓缩至近干，以1.00mLpH 4.0的水溶解残留物，经过0.45 μum滤膜过滤后供液相色谱测定。6.3测定6.3.1液相色谱条件a）1色谱柱:C18柱,250 mm×4.6 mm（内径）,粒径5 μm,或相当者;b）流动相：乙睛-水（10：90，体积比）；c）流速:1.0 mL/min;d）柱温:室温；e）检测波长：276 nm;f）进样量:20 μL。6.3.2色谱测定根据样液中棒曲霉毒素的含量情况，选定峰面积相近的标准工作溶液。标准工作溶液和样液中棒曲霉毒素的响应值均应在仪器检测的线性范围内。在选定的分