SN_T 4142-2015动物源性产品中多种抗生素残留总量检测方法 微生物代谢抑制法.pdf

SN中华人民共和国出入境检验检疫行业标准SN/T 4142-—2015动物源性产品中多种抗生素残留总量检测方法微生物代谢抑制法Determination of total residues of multi-antibiotic in animal-derivedproducts-Microbial metabolic inhibition method2015-09-01实施2015-02-09 发布中华人民共和国发布国家质量监督检验检疫总局“刮涂层查真伪。 SN/T 4142-2015前言本标准按照GB/T1.1-2009给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局。本标准主要起草人：韩伟、袁辰刚、宋青、顾鸣、朱坚。1 SN/T 4142-2015动物源性产品中多种抗生素残留总量检测方法微生物代谢抑制法1范围本标准规定了进出口动物源性食品中总抗生素残留检测的试样制备、保存和微生物代谢抑制检测方法。本标准适用于动物源产品集市贸易市场、食品工厂和实验室对（原料类）肉类、动物内脏、鸡蛋和牛奶中总抗生素残留筛选检测。2规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法（GB/T6682-2008,ISO3696：1987，MOD)3试样的制备和保存3.1试样制备3.1.1牛奶：取不少于500ml.试样，装人清洁容器内，进行标记。3.1.2肉类、动物内脏：从原始样品中取出部分有代表性样品，将可食部分放人高速组织捣碎机均质，充分混匀，用四分法缩分不少于500g试样。装入清洁容器内，进行标记。3.1.3蛋类：从原始样品中，随机分出一半（不少于500g），鲜蛋需去壳，进行标记。3.2试样保存3.2.1 牛奶:0℃～4℃保存。3.2.2肉类、动物内脏和蛋：试样于18℃以下保存。3.3保存要求在抽样和制样过程中，应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。4测定方法4.1方法提要本方法是利用特定的微生物细菌一一嗜热脂肪芽孢杆菌变种（Bacillus Stearothermophilus var.Calidolactis）,在一定的营养条件下生长。检测过程中,样品经处理获得样液,样液加到含有一定数量 SN/T 4142--2015的嗜热脂肪芽孢杆菌培养基中,65℃培养3h～4h。若样品中含有抗生素残留，就会干扰微生物的生长代谢，细菌代谢所产生的显色变化将提示抗生素残留的存在与否，即利用抗生素对敏感细菌的抑制作用来判别样品中是否含有抗生素。4.2设备和材料4.2.1离心机。4.2.2高速组织捣碎机。4.2.3均质器。4.2.4恒温水浴锅：65℃。4.2.5涡旋振荡器。4.2.6榨汁器。4.2.7玻璃试管。4.2.8可调移液器:10 μL～100 μL,100 μL～l 000 μL。4.3试剂本标准所用化学试剂为分析纯，试验用水为蒸馏水、去离子水，试验用水应符合GB/T6682的规定。4.3.1总抗生素检测试剂盒1）,可参见附录A。4.3.2抗生素标准溶液（青霉素、四环素、土霉素和金霉素），纯度≥98%，标准储备均为 10μg/mL，置2℃～8℃冰箱中保存,可使用一个月;标准工作浓度按测定要求配制，置2℃～8℃冰箱中保存,可使用一周。4.4测定步骤4.4.1样液制备肉类、动物内脏：用肉类榨汁器榨汁，取大约250uL汁液作为待测样液。蛋：取禽蛋液体至清洁容器中，均质后直接取样。牛奶：直接取样测定，牛奶样品取样后尽快检测，4℃储存不超过48h，变质奶会导致假阴性结果。4.4.2测定预先准备好可调式、带顶盖的、温度稳定在65℃的水浴锅。根据检测样品数量，从试剂盒内取出足量的测试管或板孔，然后将不用的测试管或板孔重新封口保存。测试管或板孔编号设置，分别加人阴性对照样品、抗生素标准品和样品各200μL到对应的测试管或板孔内。一次性吸嘴对应一个样品，防止交叉污染。封闭测试管或板孔，将其放置在65℃的水浴锅内培养，注意底部浸人水中，防止侧翻。培养温度和时间控制很重要，水浴锅温度应该保持在65℃士2℃,培养3h～4 h。观察阴性对照管或孔颜色变为黄色时停止培养，观察培养液的颜色变化。1）由意大利Euroclone公司提供的产品的商品名。给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用这些等效的产品。2 SN/T 4142--20154.5检测结果判断和报告如果待测样液测试管或板孔颜色由紫色变为黄色，阳性对照测试管或板孔仍呈现紫色，即报告“阴性”。如果待测样液测试管或板孔和阳性对照待测