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elisahbsag试剂检测血液标本不良反应的原因分析 航道疾病是一种全球公共卫生问题，其中中国是航道疾病的高发区之一。据估计, 我国乙型肝炎表面抗原携带者约1.2亿, 是当前严重危害人们身体健康的传染病之一。乙型肝炎表面抗原 (HBsAg) 是乙型肝炎的感染指标之一, 因此, HB-sAg的检查是体检的项目之一, 对乙型肝炎的预防和治疗具有重要的意义。检测乙型肝炎表面抗原, 常采用酶联免疫吸附试验 (ELISA) 。ELISA具有敏感性高、特异性强、操作简便等优点, 是目前检测肝炎病毒最常用的方法之一, 但影响因素也较多。笔者在使用某公司ELISA HBsAg试剂进行血液检测过程中, 有时会出现空白和阴、阳性对照以及室内质控孔的结果正常 (Cut off=0.105) , 而血液标本孔的A值却出现较高的情况 (大多数A值≥0.060) , 标本的阳性率很高 (每板90份标本中有10～20份阳性) , 且大多数可疑标本都出现弱阳性结果 (0.105≤A值≤0.500) 。本文经过仔细分析并采取相应措施, 最终发现产生假阳性的原因, 并找到了解决的方法, 现报告如下。 1 设定不同的旋转时间，离心同一组血液样品 1.1 材料表面 1.1.1 标准物质 1.1.2 试剂 1.1.3 仪器 1.2 检测操作程序sop 标本经离心机离心取血清标本。离心结束后, 试验严格按照HBsAg检测的标准操作程序 (SOP) 要求进行检测。离心程序设为3个: (1) 转速1 000 r/min, 时间5 min; (2) 转速2 000r/min, 时间5 min; (3) 转速3 000 r/min, 时间15 min。 2 结果 2.11 65个样品的测试结果 见表1。经统计学处理差异有统计学意义 (χ2=10.2, P0.01) 。 2.2 血液检测结果 笔者在使用某种ELISA HBsAg试剂进行血液检测时经常会出现数孔阳性结果 (90份标本中有3～9份阳性) , 而同一批标本改用另一种试剂检测结果全为阴性。 2.3 下洗板的下排 仪器同1.1.3本文在对血标本检测时有时会出现1或2竖排孔阳性的情况。取下洗板针放在托盘里加入温蒸馏水浸没, 放孵箱4～5 h取出, 用专用针对可能堵塞的洗板针捅通, 再用蒸馏水冲洗管路及空洗板。然后再对同一批血标本检测结果为阴性。 3 降低elisa法检测的假阳性率,并注意使用抗凝血本小区 排除了实验仪器和试剂以及操作步骤对实验结果的影响, 实验的空白和对照以及质控孔都正常, 只有血液标本检测孔的情况异常, 因此原因只能在标本方面, 笔者通过增加标本的离心时间和提高离心速度解决了影响试验的关键问题。试验结果说明, (1) 不抗凝血液标本的离心处理确实是影响ELISA HBsAg试验结果的主要因素, 当不抗凝血液标本被充分离心分离后, 就可得到理想的实验结果 (见表1) 。 (2) 当出现阳性孔的排列有一定规律时, 可能是洗板针有堵塞或封板不严造成。 (3) 其他, 如试剂的平衡时间、距有效期限的长短等对检测结果也有影响。 为了避免ELISA试验“检测时假阳性的出现”, 为了降低检测的假阳性率, 取得准确的结果, 笔者认为可采取下列措施: (1) 使用抗凝血标本, 便于标本的离心分离。 (2) 冬天抽血后最好放置温水浴中2 h凝块收缩后再行离心检测。 (3) 标本离心时, 加大离心转速 (3 000 r/min) , 延长离心时间 (离心15 min) , 使红细胞和纤维蛋白充分沉降, 使标本的离心分离更加彻底。 (4) 标本加样时避免加入红细胞和 (或) 纤维蛋白, 避免这两种干扰物质对实验结果的影响。 (5) 不抗凝血液标本放置10 h后再检测较好, 让血凝块更好地收缩, 让标本中的非特异性物质被充分地包裹, 降低非特异性反应所致的假阳性率。 (6) 选择试剂时应选择灵敏度高、特异性好、稳定性好、批间差小、操作方便省时的优良检测试剂, 国家参比实验室每年对各厂家的试剂进行质量评估并定期公布评估结果, 可作为选择试剂的主要依据。同时要注意试剂的批号和出厂日期, 虽然试剂的有效期多为1年, 最好选择刚出厂的试剂使用, 不同厂家的试剂不能混用。 (7) 用洗板机洗板时, 保证洗液注满各孔, 洗板针畅通, 还要防止针口有纤维蛋白或异物, 这些异物在洗板的过程中易产生拖带现象而导致“假阳性”的出现。每次洗板前后除用洗液冲洗管路外还要用蒸馏水冲洗管路及空洗板几次, 以防洗液在针孔口形成结晶而堵塞洗板针。 (8) 封板温育时, 各孔一定要封严, 防止阳性标本的液体蒸发, 产生周边现象从而导致“假阳性”的出现。通过以上措施, 可降低ELISA法HB-sAg检测的假阳性率, 获取理想的实验结果。 体检人员的不抗凝静脉血标本